전기영동, 형질전환 실험레포트

소개글

전기영동, 형질전환 실험레포트에 대한 보고서 자료입니다.

목차

1. Introduction
2. Meterial & Method
3. Result
4. Discussion
5. Reference

본문내용

도입은 일종의 hitch-hiking transfer라고 한다. Transfection은 배양동물세포에 DNA를 직접 도입하여 세포의 유전형질을 변이시키는 방법이다.
쉽게 정리하자면 Transformation은 nonviral DNA를 bacterial cell에 넣는 것이고 Transfection은 nonviral DNA를 mammalian cell에 넣는 것이고 Transduction은 viral DNA를 cell에 넣는 것이라고 할 수 있다. 이때, 대부분의 미생물은 자연 상태에서 형질전환이 이루어지지 않기 때문에, 이들을 인위적으로 외부의 DNA를 받아들일 수 있는 세포, 즉 형질전환이 가능한 세포(competent cell)로 만들어야 한다. Competent cell이란, 정상적인 bacteria에 화학적 처리를 하여 DNA가 잘 들어갈 수 있게 만든 cell을 의미한다. 화학적 처리를 위해 사용되는 시약은 Calcium chloride, Hexamine cobalt chloride, Manganase chloride, Di methyl sulfoxide(DMSO)등이 있는데 대부분 가장 많이 쓰이는 것은 Calcium chloride이다. 세포막은 인지질 이중층으로 되어있고 인산기를 갖고 있어 negative charge를 띤다. 삽입하고자 하는 DNA 또한 당인산 골격이 negative ion을 띠고 있으므로 competent cell의 세포막과 DNA의 전기적 상호반발로 인해 도입이 어렵다. 이때 를 첨가해줌으로써 ion이 삽입하고자 하는 DNA를 둘러싸게 되고, 전기적 반발을 감소시켜 중화시킨다. 이때 상태의 cell을 competent cell이라 한다. 여기에 Heat shock을 가해줌으로써 형질전환을 시킬 수 있다.
-Bacterial culture-
본 실험에서는 앞서 실험한 transformation된 cell을 배양했는데 colony가 거의 발견 되지 못하였다. DH5a cell은 대장균의 competent cell 종류 중에 하나인데 이러한 competent cell이 LB plate에서 자라지 못한 이유를 분석해보자면 먼저 기본적으로 transformation이 제대로 이루어지지 않았기 때문이다. 즉 항생제 저항 유전자를 가지는 plasmid가 cell안으로 들어오지 않았기 때문에 Ampicillin이라는 항생제가 처리된 LB plate에서 살아나지 못하는 경우를 생각해볼 수 있다. 형질전환 과정에서의 문제 말고도 competent cell 자체가 상태가 좋지 않았을 것 이라고도 생각할 수 있는데 이 때 형질전환을 하는 과정에서 vector가 세포 내로 들어가지 않았거나 vector자체가 문제가 있는 경우를 생각할 수 있다. 또한 형질전환이후 cell이 항생제 저항 유전자를 발현시킬 수 있도록 충분한 시간을 주지 않고 바로 배지에 culture한 것이 원인이 될 수도 있다. 유전자 발현을 한 후 항생제 내성을 가진 상태에서 배지에서 살아남을 수 있는데 발현시간을 충분히 주지 않고 곧바로 culture한 것을 원인이라고 볼 수 있다. 이에 따라 조교님이 다시 sample을 만들어 실험에 사용하였다. 이때 cell의 양을 구해보자면 먼저 PPRE cell의 OD 600값은 1.164이고 pRL-TK cell의 흡광도는 OD 600값은 2.416이다. OD 600이 1.0일 때는 이므로 각각의 cell의 양은 PPRE cell의 경우 1.164 = 0.9312이고 pRL-TK cell은 2.416 = 1.9328이다.
5. Reference
Reference 1 :
Geoffrey M.Cooper, Robert E. Hausman, 『세포학 분자적접근』6판, 2015, 월드사이언스, p.119
Reference 2 : http://blog.daum.net/soar7007/7965306
Reference 3 :
http://blog.naver.com/PostView.nhn?blogId=j1076&logNo=220187921226&parentCategoryNo=&categoryNo=1&viewDate=&isShowPopularPosts=true&from=search
Reference 4 : https://blog.naver.com/withcoffee67/70158243055
Reference 5 :
https://terms.naver.com/entry.nhn?docId=1163380&cid=40942&categoryId=32326
Reference 6 : https://m.blog.naver.com/jisung8410/220730360593
Reference 7 : http://biochemistry.yonsei.ac.kr/sub/catalog.php?CatNo=13&gene=18
Reference 8 : https://ko.wikipedia.org/wiki/%EC%84%B8%EA%B7%A0
그림 1 :　
https://m.blog.naver.com/PostView.nhn?blogId=j1076&logNo=220617005096&proxyReferer=https%3A%2F%2Fwww.google.co.kr%2F
그림 2 :
https://madscientist.wordpress.com/2016/08/02/%EC%95%84%EA%B0%80%EB%A1%9C%EC%8A%A4-%EC%A0%A4%EC%97%90%EC%84%9C-dna%EB%A5%BC-%ED%9A%8C%EC%88%98%ED%95%9C-%EB%82%A8%EC%9E%90/
그림 3 :
https://m.blog.naver.com/PostView.nhn?blogId=wldmsqkqn1&logNo=150100608787&proxyReferer=https%3A%2F%2Fwww.google.co.kr%2F
그림 4 : http://biochemistry.yonsei.ac.kr/sub/catalog.php?CatNo=13&gene=18
그림 5 :
https://www.slideshare.net/raiuniversity/bsc-micro-i-em-unit-44-culturing-is

키워드

실험,   세포생물학,   세포학,   전기영동,   형질전환,   Transformation,   세균배양