RNA의 추출과 정량

목차

*RNA의 추출과 정량*

(1)introduction

(2)실험과정

(3)Data 및 Result

(4)discussion

(5)Assignment
①TRIZOL
② Ethidium bromide(EtBr)

본문내용

하나의 과정으로 수행할 수 있는 장점을 지니고 있다
배양세포 또는 조직을 이용해서 RNA를 분리할 수 있는데. 어느것이나 우선 세포를 파괴시켜야 RNA를 분리할 수 있다. 배양세포에서 RNA를 분리시 Trizol를 사용할 때는 washing을 하지 않고 배양액을 걷어낸 후 그냥 plate에 Trizol reagent를 넣어 세포를 파괴시키면 된다.
② Ethidium bromide(EtBr)
* Gel에 ethidium bromide가 함유되어 있으면 전기영동하는 동안 어느 시기에나 자외선하에서 관찰이 가능하다. 그러나, gel에 ethidium bromide를 함유시키지 않고 전기영동한 후 gel을 ethidium bromide가 0.5 g/ml 포함된 용액에 30~45분간 더 염색하였다가 관찰하는 것이 더 선명한 DNA 띠를 관찰할 수 있다는 이유로 후자를 선호하는 실험자들도 있다. 이 때 탈색 과정은 보통 필요치 않으나, 10 ng 이하의 적은 양의 DNA를 검출할 때에는 결합하지 않은 ethidium bromide가 gel에 묻어 있으면 바탕이 흐려 보이므로 증류수나 1mM MgSO4에 담가 실온에서 20분간 탈색하면 DNA를 더 선명하게 관찰할 수 있다.
Ethidium bromide(EtBr)은 DNA 염기 사이로 끼어드는 평면구조를 가진 그룹을 지니고 있어서 이 그룹이 DNA 염기에 결합하면 유리형의 ethidium bromide보다 형광이 증가된다. 파장 254 nm에서의 자외선은 DNA에 흡수되어 이 색소에 전달되고 파장이 302 nm와 366 nm에서는 색소 자체에 자외선이 흡수되어 590 nm의 주황색 형광 가시광선을 내게 된다. Ethidium bromide는 한가닥과 쌍가닥 DNA및 RNA 검색에 모두 사용할 수 있으나 염료의 친화성이 외가닥에서보다 쌍가닥에서 더 강하다.
* 주의: Ethidium bromide는 강력한 발암물질이고 독성을 지니므로 이 염색액을 다룰 때에는 반드시 비닐장갑을 사용한다. 사용 후에 이 용액은 정화한 후 버려야 한다.
숙제 ③번 ④번은 discussion에 썼습니다^^
(6)Reference
http://biochemistry.yonsei.ac.kr/biochem_molecular/gene_cloning_25.php
http://dnai.co.kr/contents/cont_01_2.html
biochemistry, stryer, 서울 문화사 1998

키워드

RNA실험,   파장,   RNA 추출,   상등액,   흡광도,   원심분리