Northern blotting과 Western blotting

목차

<Northern blotting>
1. 원리
2. 용도
3. 방법
4. 참고사항
5. 실험절차

<Western blotting>
1. 원리
2. 방법
3. 용도
4. 참고사항
5. 사용증례

본문내용

음전하로 둘러싸 버려서 원래 전하 무시 - 크기 에만 의존 이동
2) 전기영동 전 단백의 3차구조 해제 : 강환원제(β-mercaptoethanol)를 첨가하면 3차 구조의 S-S 결합 제거
3) 단백변성을 막기 위해 조작은 4℃
4) 전기영동 검체량 : 0.5㎝×1㎜ well에 100㎕ 이하
5) 폴리아크릴아마이드:비스아크릴 아마이드 = 29:1
-검출 예상 단백크기가 작으면 비율을 낮추는 것이 좋다
-폴리아크릴아마이드의 두농도 배열
+- 윗부분 : stocking gel(5% 내외) - 동일한 크기의 단백들이 일렬 배열
+- 아래 부분 : separating gel(10% 정도) - 다시 분자량의 적은 차이에 따라 배열
6) 비특이 결합 방지 : 차단용액 - 대개 2∼3% gelatin
항체 희석
7) 세척 철저
5. 사용증례
여러 가지 세포의 핵추출물 내에서 전사조절 단백(CREB)의 발현 검출
CA77 cell - 갑상선암 세포
HeLa cell - 자궁경부 상피세포암
MW marker(kd)
양성 CREB(대장균 CREB)
동일한 위치(약 43kd)에서 띠 관찰
양 세포에서 상당히 많은량의 CREB 발현 의미

키워드

Northern blotting,   Western blotting,   분자생물학