SDS PAGE와 Western Blotting에 관하여

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실험 제목

실험 목적

실험 원리

본문내용

하여 그 다른 동물에게도 혈철을 얻어낸다. 동물 1에서 얻은 혈청에는 primary Antibody가 들어있고, 동물 2에서 얻은 혈청에는 동물1의 protein에 결합하는 secondary Antibody가 들어있어 항체를 얻을 수 있다. western blotting에서 이런 두 단계의 Antibody를 사용하는 이유는 특정 단백질만을 검출하는 primary Antibody의 생산이 어렵기 때문이다. secondary Antibody 에서는 primary Antibody가 rabbit일 경우 rabbit의 단백질을 잡을 수 있는 다른 동물의 antibody를 쉽게 생산할 수 있기 때문에 이 secondary Antibody에 검출에 이용할 수 있는 HRP등을 달아 놓은 것이다. 실제로 western blotting의 결과가 잘 나오기 위해서는 primary Antibody가 그만큼 특이적으로 특정 단백질에 강하게 결합할 수 있어야 한다.
(4) Membrane의 종류
1. Nitro cellulose
단백질 염색이나 면역 화학적 특정화에 적당한 지지역할을 함
-> non-hydrophobic transfer
2. Nylon
Nitrocellulose보다 물리적으로 더 강한 힘을 제공하고, 단백질의 부착능력이 더 우수
-> membrane
3. Poly vivlylidene Fluoride(PVPE)
Nitrocellulose와 Nylon보다 상대적으로 화학적 저항성과 기계적힘에서 우수
->hydrophobic transfer membrane
SDS PAGE와 Western Blotting에 관하여

키워드

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