[생화학 실험보고서] E coli의 DNA 플라스미드 추출 및 농도 측정 실험

본문내용

, thiocynates 등의 organic compounds에 의한 흡광이고 둘째, aromatic ring (Try, Phe, Trp)을 포함하지 않는 protein의 peptide bond에 의한 흡광이다(aromatic ring의 경우 280 nm인 자외선을 흡수). 우리조의 경우 A230가 500배 1000배 희석시 각각 -0.084, -0.094가 나왔다. 이는 reference로 사용한 water보다 적은 양이므로 위에서 언급한 iii)번의 경우실험에 미친 영향이 거의 없다고 할 수 있겠다.
3) 실제 실험을 수행함에 있어 solution을 잘못 사용하여 잘못된 실험결과를 얻었다고는 생각지 않는다. isopropanol을 넣고 centrifuge하였을 때 육안으로 확인 가능한 정도의 흰색 DNA를 얻었기 때문이다. 아마도 이후 ethanol wash할 때 ethanol을 따라 버리는 과정을 조심스럽게 수행하지 않아 얻어낸 DNA를 잃어버렸을 가능성이 큰 것 같다.
4) 500배 희석시 나타난 A260의 OD는 0.01 ~ 0.1 사이이므로 적절한 값이라고 할 수 있다. 과제실험 시 수행했었던 plasmid DNA Midi-prep결과와 비교하여 볼 때 A280이 적게 나타났다. 결과대로 해석하여 본다면 protein의 contamination이 적었다고 할 수 있지만 A280의 OD역시 0.01에 근접한 값이기 때문에 실험이 잘못 수행되었다고 할 수 있다.
=> protein의 OD가 적게 측정된 이유는 정확히 찾아볼 수 없었다. 실험을 다시 수행하여 이번 실험 결과와 비교하여 본다면 보다 정확한 원인을 알 수 있을 것 같다.
5) 실험에 사용된 EDTA는 2가 양이온 chelator로 사용되었으며 isoamylalcohol의 경우 세포막을 터뜨리는 데 사용된 계면활성제인 SDS의 거품을 제거하기 위해 phenol / chloroform에 첨가되었다.
6) TE buffer는 DNase inhibitor로 사용되어 DNA의 소화를 막기 때문에 prep한 DNA를 넣는 buffer로 사용되었고, RNase는 RNA에 의한 contamination을 제거하기 위해 사용되었다.
7. 참고문헌
1) 생화학실험(2) 실험교본, 교육과학기술부의생명특성화사업단.
2) Jeremy M. Berg, John L. Tymoczko, Lubert Stryer. 2007, Biochemistry, sixth ed.

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생화학,   생화학 실습,   생화학 실험,   생물학 실험,   E-coli,   DNA 플라스미드