실험보고서 - 세포 배양 실험

목차

Abstract
1. Introduction
2. Experimental
3. Results
4. Discussion
5. References

본문내용

Nanosphers를 주입한 암세포(A 549)이미지 관찰
암세포(A 549)를 세포배양액에 희석시켜서 원하는 농도로 만들어 준 다음 Eight well plate에 적절한 암세포농도(1x105 개 / 1ml)의 암세포부유배양액 200ul를 각각의 well에 나누어 준다. 24시간 동안 Incubator에서 보관해 주고 이후에 배지를 Suctiuon해내 주고 PBS로 3회 washing후 3개의 well에 신선한 배지 180ul 과 PBS에 용해시킨 PLGA(1mg/ml)을 20ul를 넣어준다 나머지 well 한 개엔 배지 200ul만 넣어준다. 30분간 incubation 시켜주고 약물이 섞인 배지를 다시 Suction 해내준다. 다시 PBS 200ul를 넣고 well을 3회 washing을 반복한다 4% Formaldehyde(in PBS)를 200ul 넣어주고 15분후에 Formaldehyde를 Suction해내주고 PBS 200ul를 넣어 잘 흔들고 다시 Suction 해 세척해낸다. Eight well plate의 칸막이를 제거해 준 후 mounting solution을 well 마다 한 방울씩 떨어뜨려 주고 테두리에 접착물질을 바른 다음 커버글라스를 덮어 장시간 동안 관찰이 가능한 상태의 표본을 만들어 준다. 그 후 Confocal Laser Scanning Microscope (공초점 레이저 주사 현미경)을 통해서 형광물질이 들어가 있는 암세포와 대조군의 암세포 표본을 관찰한다.
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3. Result
3-1 Cell culture
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3-2 Nanosphers를 주입한 암세포(A 549)이미지 관찰
↑ Normal
↑ Control
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4. Discussion
최종 실험간 이전에 제조했던 Nanospheres를 세포에 주입한 후 PBS에 용해해 Eight well plate에 주입한 것을 Confocal Laser Scanning Microscope:CLSM(공초점 레이저 주사현미경)를 통해 확인해 보았는데, Nanosphers와 결합된 세포와 그렇지 않은 세포를 정확히 구분한 결과물을 얻을 수 있었다.
세포실험 테스트는 Cell culture간 실험 준비 과정부터 culture 및 실험 후 정리까지의 과정에 대해서 테스트 하였다. 테스트간 실험 과정에 대하여 조원들이 모두 숙지하였고, 테스트간 중점적으로 무균실험을 위한 청결 유지를 중점적으로 생각 하였으며, 미흡사항으로는 실험 시작전 incubator에서 꺼낸 세포(A549)가 제대로 배양이 되었는지에 대한 확인 절차를 생락하였고, 피펫의 무의미한 교체로 인한 피펫 낭비가 1회 있었다. 비교적 테스트 결과는 양호한 편이였으나, 세포 실험간 기본적인 도구 사용과 사용 의미에 대해서 지속적으로 숙지하고 생각해야 하며, 작은 청결상의 실수가 세포에 미치는 영향력은 거대함에 따라 무균 실험의 중요성을 항상 되새길 필요가 있다고 생각한다.
이번 학기간 세포실험을 직접 해보고 공부하면서 세포 배양에 필요한 약물의 효능 및 기구 사용법에 대해서 정확히 습득할 수 있었고, 배양에 있어서 최적화된 약물의 농도 및 투여 양에 대해 다양한 연구가 요구되며, 또한 지속적이며 꾸준한 관찰이 필요하다는 것을 알게 되었다. 그리고 나노입자를 통한 약물전달시스템(DDS:Drug Delivery System)의 발전으로 EPR effect(Enhanced Permeability and Retention effect)에 의한 암치료 연구의 성장을 알아볼 수 있었다. 더 나아가 이러한 분야의 응용으로 암 세포의 완벽한 치료가 이루어 질 것이라고 기대해 본다.
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5. Reference
본문 참고
1. 세포배양학 개론 / 고려의학 / 김태전 저
2. 기능성 고분자 소재를 이용한 항암 나노의약품 개발동향 / 카톨릭대학교 생명공학과 / 이은성 저
3. 나노 약물전달체의 제조 및 응용 / 강원대학교 생명공학과 / 이정임, 유혁상 저
4. wikipedia search
사진 참고
1. 형광현미경 http://blog.naver.com/techsantech?Redirect=Log&logNo=40114093078
2. T-flask http://www.genedirex.com/popup_image.php?pID=540&osCsid=7766fb137f1ab1785111a51b51566d0c
3. Micro pipette http://www.enasco.com/product/SB45963M
4. 무균실험대
http://cafe.naver.com/umckorea.cafe?iframe_url=/ArticleRead.nhn%3Farticleid=361&topReferer=http://cafeblog.search.naver.com%26imgsrc=20100607_250/umckorea_1275876385165W3wdD_jpg/%BB%E7%C1%F8100604_006_umckorea.jpg
5. 동결건조기
http://blog.naver.com/lbt2002?Redirect=Log&logNo=40100840921&topReferer=http://cafeblog.search.naver.com&imgsrc=20100211_170/lbt2002_12658687608204mDhz_jpg/12_lbt2002.jpg
6. Vortex
http://cafe.naver.com/biobaek.cafe?iframe_url=/ArticleRead.nhn%3Farticleid=876&topReferer=http://cafeblog.search.naver.com%26imgsrc=20100907_36/backgmd_1283797864167h2888_jpg/vortex_backgmd.jpg
7. 회전증발기
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8. 균질기 http://www.4science.net/
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키워드

세포배양,   암세포,   보고서