RT-PCR 전기영동

소개글

RT-PCR 전기영동에 대한 보고서 자료입니다.

목차

a.실험 제목

b.실험 목적

c.이론

d.실험 기구 및 시약

본문내용

를 thermal cycler에 세트시키고, 다음과 같이 지정된 온도를 반복시키는 프로그램을 실행한다.
① 94℃. 1분(DNA 변성 : 초기가열)
<증폭 사이클>
② 94℃. 1분(DNA 변성)
③ 55℃. 1분(주형 DNA와 프라이머의 annealing : annealing)
④ 72℃. 1분(DNA 중합효소에 의한 프라이머 신장 : 신장반응)
②～④의 증폭 사이클을 20～30회 반복 수행한다.
⑤ 72℃. 2분(DNA의 합성이 완결되도록 확인반응 : 추가 신장반응)
②～④의 사이클 수는 주형 DNA의 상태와 양에 의존된다. 일반적으로 genome DNA를 주형으로 할때는 30～35사이클 후에 5㎕ 정도의 반응액을 취하고, 40사이클 실행시킨 시료와 함께 증폭된 밴드를 비교하여 결과를 판단한다.
6) 반응이 종료된 뒤, 반응액을 thermal cycler에 놓아둔 채로 다음의 조작을 실행하기까지 온도는 실온이나 4℃로 유지해 둔다. 그러나 thermal block의 수명을 연장시키기 위해 매번 반응액의 온도를 4℃로 유지할 필요는 없다.
7) Thermal cycler에서 반응에 사용한 소형 튜브를 꺼낸다. 만약 미네랄 오일이 과잉으로 들어있는 시료는 팁을 주의 깊게 미네랄 오일 하층의 반응액까지 넣어서 약 45㎕의 반응액을 들어낸다. 이때 미네랄 오일은 절대 섞이지 않도록 한다.
8) 팁의 외측에 묻어있는 미네랄 오일은 닦아내고 반응액을 새 소형 튜브에 넣는다.
9) 5～15㎕의 시료를 아가로스 겔 전기영동으로 분석한다. 이때는 반드시 DNA 마커를 동시에 영동하는 것을 잊어서는 안 된다.

키워드

전기영동,   RT-PCR,   실험