|
아가로스 농도가 낮을수록 분자량이 큰 것이 좋고 농도가 높으면 더 촘촘해지므로 작은것에 적당하다. 이 번 실험 결과 6조의 경우가 가장 잘 분리되어 알아보기 쉬었고, 4조의 경우는 실수를 하여 다른 조에 비해 시간이 짧다보니 DNA 가 덜 분
|
|
|
전기영동한 후 gel을 ethidium bromide가 0.5 μg/ml 포함된 용액에 30~45분간 더 염색하였다가 관찰하는 것이 더 선명한 DNA 띠를 관찰할 수 있다는 이유로 후자를 선호하는 실험자들도 있다. 이때 탈색과정은 보통 필요치 않으나, 10 ng 이하의 적은양의
|
|
|
-플라스미드 분리
-원심분리기
원심분리기는
-아가로스
3. 실험준비물
1)소모성 재료
2)기기
4. 실험방법
1)Plasmid mini prep kit을 이용한 정제
2)아가로스 젤 만들기
3)전기영동
3)DNA 확인
5. 실험결과
6. 고찰
|
|
|
실험 제목
2. 실험 목적
3. 이론 및 원리
(1) PCR(Polymerase Chain Reaction, 중합효소 연쇄반응)
1) 원리
2) 방법
3) 프라이머(Primer)
4) DNA 중합효소
5) PCR의 이용
(2) 전기영동(Electrophoresis)
1) 전기영동의 원리
2) 전기영동의 매질
3) 전기영
|
|
|
DNA는 선형 DNA보다 빠르게 움직인다.
아가로오스 농도 (% W/V)
DNA의 분리범위 (kb)
0.3
5 - 60
0.6
1 - 20
0.7
0.8 - 10
0.9
0.5 - 7
1.2
0.4 - 6
1.5
0.2 - 3
2.0
0.1 - 2
※ Agarose gel 전기영동시 DNA의 이동에 영향을 주는 요인들
1) DNA 분자의 크기가 클수록 느리게 이동한
|
|
 |
분리향상」, 분석과학, Vol.19, No.6, 김희준외 6명 공저, 한국분석과학회, 2006, p529-532.
-「최신 생화학」, 김을상, 신광문화사, p135-138.
-「다양한 정제방법에 의한 전기영동용 한처유래 아가로즈의 제조 및 DNA 분리특성」, 한국식 품과학회지 Vol.31
|
|
|
DNA mar
ker를 이용하여 검정할 수 있다는 결론도 얻었다.
5. References
- 농림수산식품부(2008) 수박ㆍ멜론의 품종 지문화 연구 및 순도검정 마커 개발. 연구보고서 3-84
- 이계동(2003) 수박 F1 종자 순도 검정을 위한 DNA Marker 개발. 한경대 산업대학원
-
|
|
|
경우 효소에 의해 다시 잘려, agarose gel로 전기영동 하였을 때 vector와 insert, 이렇게 2 band로 나오는 것을 이용한 것이다.
DNA
10㎕
10×H buffer
2㎕
NdeⅠ
1㎕
XhoⅠ
1㎕
DDW
6㎕
total
20㎕
다시 PCR로 확인해 보았다.
premix에 다음과 같이 넣고 PCR을 했다.
DNA
|
|
메뉴펼치기
