미생물 수의 측정 및 마이크로피펫 사용법

목차

1. 미생물 수의 측정
① 직접계수법
② 생존수 계수법 (Viable Count Procedures)
③ 플레이트 카운트법(Plate Count)
④ 최확수법(Most Probable Number. MPN)

2. 마이크로피펫 사용법

3. 마이크로피펫은 사용 주의사항

본문내용

할 수 있는데 이는 50%의 시험관에 세포이병효과(CPE)가 나타나는 최저 바이러스액 희석농도를 말한다.
플레이트 카운트법과 마찬가지로 MPN법에 있어서도 특정 미생물군만을 계수한다든지 원하는 특성을 가진 미생물을 식별하기 위해서 배지와 부란조건을 조절할 수 있다. 또한 MPN법은 특정한 탄소기질을 이용하는 미생물을 계수하는데 이용될 수 있다. 분명히 부란조건과 특정 그룹의 세균을 계수하는 배지의 조합은 무수히 많다. 그러므로 결과를 정확히 해석하기 위해서는 각 절차들이 주의깊게 선정되고 검사되어야 한다.
2. 마이크로피펫 사용법
마이크로피펫 (micropipette) 은 외과의사가 메스를 쓰는 것과 같이 분자생물학을 실험하는 사람들의 주된 도구입니다. 마이크로피펫을 얼마나 능숙하게 쓰느냐에 따라서 실험의 결과 (즉, 환자의 예후 ... ) 가 크게 달라집니다.
유리 피펫은 입으로 빨아올리지만 분자생물학실험에서는 시약의 단위가 워낙 작으므로 이와 같은 마이크로피펫을 사용합니다.
마이크로피펫은 용량에 따라서 네 가지 종류가 있습니다. 용량의 단위는 microliter ( = 1/1,000,000 liter, 사람 모양 (人) 의 그리스 문자인 lambda 라고도 합니다) 입니다.
이 용량은 마이크로피펫 손잡이에 붙어있는 라벨로 알 수 있습니다. 왼쪽으로부터 1000 microliter (이것만 파란색이고 나머지는 노랑색입니다), 200 microliter, 100 microliter, 20 microliter 짜리입니다.
피펫 옆을 보면 숫자눈금이 있습니다. 붉은색 글씨가 0 또는 1000 단위 (microliter) 를 나타냅니다. 다른 숫자는 소숫점처럼 읽으면 됩니다. 따라서 왼쪽으로부터 가리키는 숫자는 각각 1.00 (x 1000) = 1000 microliter (즉, 1 ml 입니다) , 200 microliter, 100 microliter, 20.0 microliter 가 됩니다.
이렇게 한 번에 피펫으로 취하는 용량은 피펫 머리부분의 돌리는 손잡이로 조절합니다. 쌍안경의 거리조절손잡이와 비슷하게 생겼습니다.
실험할 때는 사용하는 용량과 비슷한 범위의 마이크로피펫을 쓰는 것이 정확하고 편합니다.
마이크로피펫은 disposal tip 을 사용합니다. 피펫의 용량 라벨의 색과 같은 tip 을 쓰면 됩니다. 1000 microliter 짜리 피펫만 파란색 tip 을 쓰고 나머지는 노랑색 tip 을 사용합니다. 여기에는 나와 있지 않는데, 10 microliter 짜리 초소형 tip 도 있습니다. 이것은 투명한 흰색입니다.
3. 마이크로피펫은 사용 주의사항
1. 각 파이펫의 눈금 범위 밖으로 돌리지 않습니다.
2. 피펫위의 단추를 누르면 걸리는 곳까지가 정확한 용량입니다. 더 눌러지는 것은 남아있는 잔류 용량을 불어내려고 하는 것입니다 (따라서 용액을 빨아들이기 전에는 한 번 딸깍 걸리는 곳까지만 단추를 누르고 용액을 취하고, 용액을 불어낼 때에는 한 번 딸깍 걸린 후에 좀 더 밀어내서 tip 안에 남아있는 용액을 모두 불어냅니다).
3. 용액을 취할 때와 옮길 때는 천천히 버튼을 조작 합니다. (분자생물학 실험은 뭐든지 절차대로 천천히 정확하게 하는 것이 제일입니다).
4. 용액이 담긴 상태로 파이펫을 거꾸로 세우지 않습니다. (이러다가 용액 속의 DNA 가 피펫에 묻거나 하면 그 피펫은 쓸 수 없게 됩니다).
5. 유기 용매를 다룰 때는 특히 조심 합니다.
6. 파이펫팅은 원칙적으로 눈 앞 가까이에서 바로 보면서 하도록 합니다. 파이펫팅 동안에 양손이 움직이면 안 되므로 두 팔꿈치를 모두 실험대에 대고 하는 것이 좋습니다.

키워드

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