lowry method & Bradford Assay

소개글

lowry method & Bradford Assay에 대한 보고서 자료입니다.

목차

(1) 실험목적

(2) 실험과정

(3) 실험결과

(4) 결과의 분석 및 토의

참고문헌

본문내용

매우 특이적이며 sensitivity가 높다. 반면, 넓은 범위에 걸친 standard curve 의 경우 non-linear하며 각각의 단백질의 에 대한 반응이 다양할 수 있으므로 standard의 선택이 중요하다. 사용되는 단백질은 비가역적으로 변성되며, 2개의 Coomassie Brilliant Blue G-250 species의 흡광도가 부분적으로 겹치므로 표준곡선을 만드는 것이 매우 중요하다.
Bradford Assay가 Lowry method와 다른 점은 단백질에 매우 특이적이라는 것이다. 각각의 단백질에 대한 반응이 다양한데다, 반응이 끝난 후 흡광을 일으키는 CBBG의 종류가 한 가지가 아닌데다, 부분적으로 그 흡광도가 겹치기 때문에 정확한 표준 곡선을 얻기가 비교적 어려울 것이다. 우리는 Bradford Assay가 Lowry method에 비해 정확하다고 배웠는데, 실험에서는 오히려 조금더 큰 오차가 생긴 것은 이러한 이유 때문인 것 같다. 그렇지만 Bradford Assay는 일반적인 시약들에 대한 간섭효과가 작기 때문에 적절한 standard을 선택해서 표준곡선을 그리면 더욱 정확한 결과를 얻을 수 있다. 실제로 7조의 단백질 함량 결과를 보면, Bradford Assay는 표준편차가 약 0.4717이고, Lowry method의 결과는 표준편차 0.7235로, Bradford Assay의 결과가 더 정밀하게 나왔음을 알 수 있다. 따라서 만약 standard 용액을 우유와 비슷한 성분의 단백질이 들어있는 standard용액을 택하여 표준곡선을 그린다면 Bradford Assay 를 통한 정량법을 통해 더 나은 결과를 얻을 수 있을 것이다. 완벽한 결과를 위해서는 우유를 standard로 써야 겠지만, 이는 우유의 단백질 함량을 실험 전에 알고 있어야 표준곡선을 그릴 수 있으므로, Bradford Assay 실험을 할 수 조차 없다. 이러한 이유들로 인해 실제로 우유의 단백질 정량은 위의 두 실험 방법 보다는
주의사항
dye는 tyr,trp, his,phe보다 arg에 약 8배는 많이 반응한다
-CBBG dye는 quartz cuvette에 강하게 결합하므로 glass나 plastic cuvette를 사용한다.
-dye color는 약 5분후 완전히 단백질과 반응하고, 10-15분후에는 침전하기 시작한다.
-BSA는 2.5ug-15ug에서 linear curve를 보인다
※ 참고문헌
김동열, 식품화학, 문이당, 1988년, pp691-693
Ceirwyn S. James, 알기쉬운 식품분석화학, 광문각, 2001년, 294p
http://blog.korea.ac.kr/servlet/DownLoad/%EB%8B%A8%EB%B0%B1%EC%A7%88%EC%A0%95%EB%9F%89%EB%B2%95.ppt?attachmentId=3401#13 (2006.10.02)

http://chem.kongju.ac.kr/~bio/sub5/view.php?mode=data&number=13&page=1(2006.10.02)

키워드

lowry method,   Bradford Assay,   단백질 정량