Gel Filtration을 이용한 molecular weight 결정

소개글

Gel Filtration을 이용한 molecular weight 결정에 대한 보고서 자료입니다.

목차

1. 실험제목

2. 실험날짜

3. 제출자 및 공동실험자

4. 실험목적

5. 실험원리

6. 시약 및 기자재

7. 실험방법

8. 결과

9. 고찰

10. 참고문헌

11. Further study

본문내용

실험의 경우 결과에도 썼듯이 미지시료의 molecular weight를 10.814KDa이 나왔다.
10. 참고문헌
1) 한국생화학회 (1999) 실험생화학, 탐구당, 서울
2) 생화학실험(1) 전반기 (2004)
3) Biochemistry, Stryer 외, Freeman
11. 문제
1) , 와 관계에서 다음과 같이 를 정의할 수 있다.
이 때 0<<1가 되는 이유와 이 가 의미하는 것은?
☞ 에서 는 상수값이다. 가 의미하는 것은 total volume에서 void volume을 뺀 것, 즉 bead volume을 의미하는 것이기 때문에 colume 안에 bead를 한 번 packing하면 그 값이 변하지 않기 때문에 는 상수값이 된다. 그렇기 때문에 의 값은 에 의해 결정 된다. 가 0일 때는 물질이 너무 커서 바로 분리되어 나올 때를 말하며, 이 때는 가 된다. 가 0과 1사이일 때는 가 되며 이 때는 protein의 크기에 따라 bead에 들어갈 수 있는 것이 있고 없는 것이 있게 된다. 가 1일 때에는 protein이 너무 작아서 colume에 오래 머물러 있을 때로 이 때는 가 된다. 그러므로 는 분배계수로써 을 의미한다. 즉 molecular weight이 작을수록 단백질은 gel을 통과하는 시간이 길어져서 가 크게 나오게 된다. 가 크게 나오면 그것에 비례하여 의 값도 크게 나오게 된다. 그러므로 값이 크면 molecular weight이 작다는 것을 알 수 있다.
2) gel filtration chromatography에서 분자량을 결정할 수 있다면 어떻게 가능한가?
☞ 그림 2.와 같은 graph를 만든 뒤 추세선을 이용하여 1차 곡선인 y=ax+b의 형태를 얻고 이것을 이용하여 molecular weight을 구할 수 있다. 여기에서 y는 logM.W가 되고 x는 가 되기 때문에 sample 측정을 통해 안 logM.W와 을 이용하여 a와 b값을 쉽게 구 할 수 있고, 미지시료의 값을 구한 뒤 y=ax+b의 식에 대입해서 logM.W값을 구할 수 있고 log값을 계산하면 미지시료의 molecular weight을 구할 수 있다.
3) blue dextran은 분자량이 2,000,000 Da이다. 앞의 실험에서 blue dextran이 용출되는 volume과 사이의 관계는?
☞ Blue dextran은 2000KDa이기 때문에 colume안의 bead에 전혀 들어갈 수 없고 그냥 흘러 나오게 된다. 그러므로 blue dextran이 elution된 volume이 void volume과 일치하게 된다.
12. Further study
1) Cytochrome c의 경우 410nm에서 흡광도를 재는데 그 이유는 무엇인가?
☞ Cytochrome c는 그 구조 안에 heme structure를 많이 가지고 있다. 이런 heme 구조는 aromatic ring을 많이 가지고 있는데 이 aromatic ring은 빛을 더 많이 흡수하기 때문에 410nm에서 cytochrome c의 흡광정도를 더 잘 관찰 할 수 있다.

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