[생물실험, 생화학 실험] circular 플라스미드 DNA 제한효소자리 mapping

본문내용

sfection, infection(transduction)이 있다. 이들의 차이점은 무엇일까?
- Transfection: virus vector와 같은 것들을 이용하여 eukaryotic cell로 외부 물질을 주입하는 것으로 주로 mammalian cells에 쓰이는 용어이다. 또한 DNA introduction 의해 변화된 세포의 성질을 일컫기도 한다.
- Transformation: Transfemtion과는 다르게 non-viral DNA를 bacteria 나 non-animal eukaryotic cells (fungi, algae and plants)에 주입하는 과정을 말한다. animal cell biology에서는 또다른 의미로 사용하기도 한다. (culture에서 오랜 기간 propagation하거나 cancer cells의 성질을 가지게 만드는 유전적인 변화)
- Infection(transduction): viral, bacterial DNA, 또는 앞의 두가지 모두를 bacteriophage를 이용해서 한 cell로부터 다른 cell로 옮기는 과정.
3. 우리는 transformation을 시킬 때 heat-shock을 이용하였다. heat-shock 외에 transformation을 시킬 수 있는 방법에는 어떠한 것들이 있을까?
- electroporation : 고전압의 전기를 흘려 DNA가 들어가도록 하는 방법
- bacteriophage : 박테리아를 숙주로 하는 파지에 도입코자 하는 DNA를 넣고 감염시키는 방법
- bombardment(gene gun) : 순간적인 고압으로 DNA를 총처럼 발사해서 세포벽을 뚫고 들어가도록 하는 방법(주로 식물에 쓰임)
4. Transformation efficiency를 측정하는 방법은 무엇일까?
Transformation efficiency는 successful transformants의 수를 transformation 실험 과정 동안 사용된 총 DNA양으로 나눈 값이다. Transformants는 주입된 DNA나 주입된 DNA에서 발현되는 gene을 말한다. Transformation으로 사용되는 competent cell의 Transformation efficiency는 보통 10^8transfomed colony/ug of supercoiled plasmid DNA 정도가 적당하다. Supercoiled plasmid DNA를 1ng 또는 1pg으로 희석하여 transformation 시킨 후, 형성된 colonies의 수를 세고 1ug으로 환산하여 계산하면 된다.
Reference
-생화학 실험(2) 전반부 실험교본 (2008)
-심웅섭외 6인, 1999, 분자생물학, 원드사이언스, p386 ~ 387
-http://en.wikipedia.org/wiki/Transfection
-http://en.wikipedia.org/wiki/Transduction
-http://en.wikipedia.org/wiki/Transformation_efficiency

키워드

생화학실험,   생물실험,   제한효소,   restriction mapping,   plasmid DNA,   transformatioin