세포생물학-Digestion of DNA, Electrophoresis of DNA-2

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목차

세포생물학 실험Ⅱ
Exp.5,6 Digestion of DNA, Electrophoresis of DNA-2


1.Introduction
-1. Digestion of DNA란
-2. 제한효소를 이용한 Digestion
-3. 3가지의 제한효소

*Reference


세포생물학 실험Ⅱ
Exp.5,6 Digestion of DNA, Electrophoresis of DNA-2

2. Material
3. Method
4. Result
5. Discussion

*Reference

본문내용

lease의 대표적인 것이 바로 제한효소(restriction enzyme, restriction endonuclease)이며, DNA에 존재하는 특정한 염기서열을 인식하고 인식한 서열부위 또는 그 근처에 존재하는 특정부위를 절단한다. 제한효소는 원래 세균이 자신의 세포 내로 침입해 들어오는 바이러스와 같은 외부 DNA를 제거하기 위한 방어기전으로 가지고 있는 것이며, 자신의 DNA는 절단부위의 염기(adenine, cytosine)를 methylation시켜서 자신의 제한효소가 자신의 DNA를 자를 수 없게 보호하고 있다.
-2. 제한효소를 이용한 Digestion
대부분의 박테리아에서 발견되는 제한효소는 외래 생물체의 DNA를 인식하고 분해한다. 박테리아는 수 백만년 동안 외래 DNA의 침입에 직면해 왔으며, 침투한 DNA를 파괴하는 동안 자신의 DNA를 보존하는 보호 메카니즘으로써 이들 효소들을 발전시켜 왔다. 각 제한효소는 일반적으로 4~5 염기쌍 정도의 짧은 염기서열만을 인식한다. 예를 들어 최초의 분리된 제한효소중 하나의 EcoRI은 오직 다음 염기서열을 가진 DNA만을 전달한다. 이 경우 표적 염기서열은 앞쪽과 뒤쪽으로 똑같이 읽혀지기 때문에 팔린드롬 구조(또는 회문성구조)라 불린다. 간단히 언급하면 많은 제한효소는 회문성 구조의 표적서열을 인식한다. 만일 이 서열이 침입한 원형의 플라스미드에 하나 존재한다면 효소는 그곳을 한번 절단하여 원형을 푼다. 만약 이 서열이 여러 부위에 있다면 DNA는 여러 조각으로 절단되게 된다. 일반적으로 제한효소의 명칭은 출처 박테리아의 속명 첫 자와 종명의 처음 두 문자로 나타낸다. 수 백개의 제한효소들이 수 백종에 이르는 미생물로부터 분리되었다. 분자생물학자들은 제한효소로 실험관내에서 플라스미드를 절개하여 외래 DNA를 삼입할 수 있다. 또한 제한효소는 예측할 수 있는 어떤 DNA 절편을 분리할 수 있는 방법도 제공해 준다. 제한효소의 발견으로 클로닝에 의해 선택된 DNA 절편을 정확히 복제하여 대량으로 얻는 것이 수월하게 되었다. DNA는 plasmid 와 같이 일반적으로 Supercoiled의 형태를 이루고 있다. Electriphoresis 시, Agarose gel상에서 DNA를 전기영동할 때 작은 DNA는 쉽게 통과하여 빨리 내려가지만 큰 DNA는 쉽게 통과하지 못해 느리게 내려간다. DNA의 supercioiled 구조는 DNA의 부피를 작게 만들기

키워드

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