[공업화학 기초실험]TLC(Thin Layer Chromatography)

소개글

[공업화학 기초실험]TLC(Thin Layer Chromatography)에 대한 보고서 자료입니다.

목차

1. INTRODUCT

1-1. 크로마토그래피

1-2. 박막크로마토 그래피

2. EXPERAIMENT

2-1. 시약 및 기구

2-2. 실 험 방 법

2-3. 주 의 사 힝

3. RESULT

3-1. Rf 값 계산

3-2. Graph

4. DISCUSSION

5. REFRENCE

본문내용

큰 도움이 된다. 또, 시료에 따라 적당한 지지체를 골라 쓸 수가 있고, 경우에 따라서는 이온 교환성을 지닌 물질을 지지체로 사용할 수 도 있다. 그리고 이 실험 방법은 밑에 처럼 분리 할수 있다.
. TLC판 설정
TLC용 지지체를 적당한 양의 물에 풀어서 유리판(예; 20×20㎝, 4×10㎝) 위에 250㎛ 두께로 얇게 바른다(그림 Ⅱ-25). 막의 두께가 200㎛ 이하의 것은 Rf값에 큰 영향을 끼치므로 부적당하다.
지지체가 잘 붙게 하기 위해 대개는 구운 석고 같은 것을 섞는다. 막이 굳어질 때까지 공기 중에 두었다가 전개하기 전에 얇은 막판을 건조기(100∼105。C) 속에서 30분∼1 시간 동안 건조시켜 식힌 후에 시료 용액을 점적한다.
. 시료의 점적
점적은 종이 크로마토그래피에서 실시한 방법에 준하면 된다. 즉, TLC판의 끝 쪽에서 2㎝ 되는 곳에 출발선을 표시하고, 그 위에 1㎝ 간격으로 시료 용액을 점적한다. 그리고 출발선에서 10㎝ 되는 곳에 전진선을 표시해 둔다.
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. 전개방법
TLC에서는 상승식 전개법을 쓴다. 즉, 점적한 TLC판을 전개통속에 거의 수직 방향으로 세워둔다.
전개통 속이 용매의 증기로 포화되도록 작은 전개통을 사용하고, 또 전개통 안쪽 3면에 전개 용매를 충분히 흡수한 거름종이로 휘장을 친다. TLC의 경우에도 이미 확인된 대조 물질을 함께 전개시킨다.
. 검출방법
종이 크로마토그래피에서와 마찬가지로, 무색의 시료에 대해서는 적당한 발색 시약을 뿌려서 반점의 Rf값을 계산한다. 방사성 물질일 경우에는 방사능을 주사하여 반점의 위치를 알아낸다.
예로서, TLC법으로 지방질 성분의 분리·확인하는 실험을 설명하기로 한다.
생체 조직에는 각종 지방질이 함께 존재하므로, 지방질의 혼합물 시료를 우선 적당한 용매로 몇 분획으로 크게 나눈 다음, 각 분획 속에 들어 있는
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성분을 TLC로 확인힌다. 일반적으로, 중성 지방질의 전개 용매로는 무극성 용매(예, 탄화수소)를 쓰고, 전하를 가진 지방질의 전개에는 극성 용매(클로로포름, 아세트산, 메탄올 등)를 쓴다.
지방질의 TLC에 있어서 가장 많이 사용되는 지지체는 실리카겔이다. 지방질은 디클로로플루오레세인(dichlorofluorescein)에 의해 녹색의 형광성 반점으로 나타난다. 또, 황산을 뿌려서 지방의 반점(흑색)을 확인할 수도 있다.
. R값
R는 각 물질마다 특정한 용매 조건에서 어떻게 움직이는가를 나타낸다. R값이 근접하거나 같으면 이 물질이 동일한 물질인가를 알 수 있는 지표이다. R용질이 이동한 거리를(D₁)를 용매가 이동한 거리(D₂)로 나눈다
D₁= 각 용질이 이동한 거리
D₂= 용매가 이동한 거리
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2. Experiment
2-1. 시약및 기구
. 시약
용매 = Methylene chloride + Methanol(9:1 비율).
용질 = Triethyl phosphate(A), Benzene bromide(B), A+B
. 실험 기구
TLC판(7개), UV램프, 비중병(5개), 거름종이, 모세관
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2-2. 실험 방법
실험을 시작하기에 앞서 우리는 우선 TLC 판 각각 개인당 하나씩 배분 될수 있도록 가로 2 ㎝, 세로 5 ㎝ 정도로 잘라 위 아래 0.5 ㎝부근에 직선을 긋고 시작부분을 표시한뒤 각각 의 앞에 놔 두었다. 그리고 용매는 Methylene chloride와 Methanol을 9:1 비율로 만들어 두 조가 함께 쓸 수 있도록 만들어놨다.
그리고 각각 비중병에 거름종이를 부채꼴 모양으로 접어 넣어 두었고, 용매를 약간 부어 뚜껑을 막아놨다. 우리의 이번실험 목표는 TLC판에서 우리가 이미 알고 있는 물질 두 개와 그 혼합물을 넣어 확실하게 분리 되는지 알아보는 실험이기 때문에 Triethyl phosphate(A), Benzene bromide(B)과 이 두 개의 혼합물을 비중병에서 덜어왔다. 그리고 각각 TLC판에 모세관으로 점을 찍듯이 포인트를 찍었다. 세 점을 찍고난뒤 미리 용매를 부어둔 비중병안에 TLC판을 넣어 두었다. 용매가 끝에 그어논 선까지 올라왔을때, TlC판을 꺼내서 UV램프로 비췄다. 램프로 비췄을때 가장 선명하고 크게 나온 포인트를 연필로 체크 해두었다. 그리고 용매가 이동한 거리와 점이 찍힌 거리를 재서 R값을 구했다. 각가의 R값을 산술 평균해서 평균 R값을 구했다.
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2-3. 실험시 유의사항
1. BenZen같은경우는 인체에 해롭기 때문에 주의해서 다뤄야한다.
2. TLC판의 표면에 불순물이 묻지 않게 주의해야한다.
3. 실험에서 휘발성이 큰 물질을 사용하기 때문에 실험시 마개를 잘 막거나 빠른 시간에 실험을 진행해야한다.
4. 용매의 극성이 너무 좋거나 TLC판에 이물질이 묻은 경우에는 좀이 잘 보이지 않는다.
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4. Discussion
이번 우리 실험은 정해진 시료를 TLC로 분리해 낼 수 있는 능력을 기르는데 중점을 둔 실험이었다. 이번 실험에서 주의 할 점이 상당히 많았는데 실험전에 많이 간과하고 시작한 것 갔다. 첫째로 우리가 이번 실험 할 때 고생했던건 우리가 사용한 시약들이 전부 휘발성이 강하다는 것 이었다. 그것 때문에 처음에 용매를 만들어오고 TLC판을 나눌 때까지 시작이 좀 경과하자 전부 날라가 버렸다. 덕분에 많이 날라가 버렸고, 그로인해 다시 만들 수 밖에 없었다. 그건 용매뿐만 아니라 용질의 시약도 마찬가지였다. 그리고 TLC판에 점을 찍을 때 역시도 처음에 점이 너무 크게 찍히는 바람에 다시 여러번 찍었다. 그리고 용매가 끝까지 올라오고 나서 바로 UV램프를 비춰보지 않아서 순식간에 용매가 증발해버려 몇 번을 실험을 다시 해야 했다. 그리고 실험전에 조교님이 TLC판에 불순물이 묻지 않게 주의 하라고 하셨는데 나중에 UV램프에 비춰 보고서야 알았다. 이 불순물들이 전부 용매를 따라 올라와서 램프에 비춰보면 작게 비춰서 무슨점을 찍어햐 할지 헷갈리게 만들었다. 덕분에 여러개를 버려야했다. 생각했던 것 보다 실험이 어려워졌고 휘발성이 강한 시료들 때문에 실험 하는 동안에 정신없었던 것 같다. 그리고 이번 실험을 시작하기 전부터 문제가

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TLC,   공업,   화학실험