경희대학교 분자생물학 실험 ,restriction enzyme으로 plasmid 절단후 전기영동으로 관찰.

소개글

경희대학교 분자생물학 실험 ,restriction enzyme으로 plasmid 절단후 전기영동으로 관찰.에 대한 보고서 자료입니다.

목차

introduction

1. dna ligase

2. Enzyme unit definition

1) weiss unit
2) Cohesive End Unit

3. centrifuge
4. Elution buffer

본문내용

Restriction Enzyme(BamH 1, Xho 1) 으로 digestion 한 DNA(gene X+ pGEMTE)를 새로운 벡터인 pGEX6P-1에 넣고, 결과적으로 ligase 하는데 목적이 있다.
또한 이번실험에서는 우선 Gel electrophoresis 후 Gene을 분리시켜 Gel이 표지된 부분만을 잘라, Gel을 녹여, 다시 추출하는 과정을 선행하였는데, 그 이유는 우선 electrophoresis로 gene X와 pGEMTE를 분리하기 위해서이다.
따라서 geneX와 pGEX6P-1이 표지된 gel 부분만 extract 하고 pGEMTE는 extract 하지 않았다.
이번실험에서 우리조(2조)는 첫번째 electrophoresis를 하는 도중, agarose gel 이 불량인 관계로 DNA가 Pipetting 도중 새어나갔기 때문에, extraction 실험은, 예비로 만든 DNA gel을 활용하기로 하였다.
따라서 첫 번째 electrophoresis 결과 대부분 조의 Gene들이 일정한 지점에서 형광을 나타내지만, 우리조는 DNA가 Gel에 제대로 가둬지지 않아 퍼져서 흐릿하게 띄를 이루는 현상을 나타내었다.
gel extraction 결과, GeneX, pGEX6P-1가 다시 추출됨을 확인할수 있다. 다만 첫 번째에 데이터의 결과에 비해 DNA가 흐릿하게 나온 이유는, 우선 DNA가 양이 많을수록, UV에서 밝게 빛나기 때문에, Extraction을 하면서 DNA가 담긴 gel 이 Qc buffer, Centrifuge , Elution Buffer, 등을 통과하면서 상당량 소실

키워드

recombinant,   subcloning,   BamH1,   restriction enzyme,   제한효소,   plasmid,   플라스미드