병원미생물학실험_report_3_(단순염색 및 그람염색)

소개글

병원미생물학실험_report_3_(단순염색 및 그람염색)에 대한 보고서 자료입니다.

목차

1. Subject
2. Object
3. Principle
4. Apparatus & Reagents
5. Procedure
6. Result
7. 고찰
8. 참고문헌

본문내용

에 멸균하여 식힌 후 약간의 균주를 묻혀 dH2O와 골고루 섞고 도 말 한 다 .
3. 공기 중에 1분 건조시킨 후 열 고정 하기 위해 alcohol lamp의 불꽃을 2~3회 빨리
통과시킨다.
4. 열 고정한 slide glass를 crystal violet으로 덮고 60초간 놓아둔다.
3. 흐르는 물로 슬라이드를 씻는다. (slide glass에 직접 물이 흐르지 않도록 한다.)
4. 건조하지 않은 채로 slide glass를 옥도용액으로 60초간 덮는다.
5. 수세하지 않고 95% ethyl alcohol로 탈색시킨다. (다량의 보라색이 씻겨 나갈 때까지
알코올이 smear를 통해 흐르도록 한다. 너무 과하게 탈색 시켜서는 안 된다. )
6. 즉시 멸균수로 씻는다.(알코올에 의한 탈색이 지속되는 것을 방지하기 위함이다.)
7. Safranin 용액을 30초 동안 처리한다.
8. 물로 씻은 후 슬라이드를 종이 수건이나 흡수지로 빨아들이고 나머지는 공기 중에 건
조시킨다.
9. 염색된 슬라이드를 현미경으로 관찰한다.
7. Result
단순염색방법은 단순히 세균의 일반적인 형태와 세균의 배열만을 관찰할 수 있으므로 Escherichia coli가 그람 양성균인지, 그람 음성균 인지는 판별할 수 없으며 단지 막대 모양의 간균 형태라는 것만 알 수 있다.
첫 번째 결과는 균들도 모두 씻겨 내려가고 염색 또한 전혀 되지 않았다.
Bacillus subtilis는 그람 양성균으로, 이론상으로는 보라색으로 관찰되어야하나, 현 실험에서는 붉은색으로 관찰 되었다.
일부 균들만 crystal violet으로 염색되어 에탄올에 의해 탈색되지 않은 상태로 관찰된다.
실험결과로 Bacillus subtilis균은 그람 양성균임을 알 수 있다.
상단의 사진은 다른 조에서 실시한 Bacillus subtilis를 그람 염색한 현미경 사진으로, 우리 조의 사진에 비해 아주 깔끔하게 보라색으로 염색된 결과가 나왔다.
crystal violet으로 염색했음에도 불구하고 에탄올에 의해 탈색되고, safranin으로 염색되어 붉은색으로 나타났다는 것은 대장균이 그람 음성균임을 예상할 수 있다.
그람 염색 실시한 Enterococcus faecalis의 현미경 사진
다른 균들과 달리 형태가 구균으로 관찰되며, 바실러스 균과 마찬가지로 crystal violet으로 염색되어 에탄올에 의해 탈색되지 않아 보라색으로 관찰된 것으로 보아 Enterococcus faecalis는 그람 양성균임을 실험 결과를 통해 알 수 있다.
7. 고찰
그람 염색 첫 번째 실험에서 균체들이 유실된 이유
실험 과정 중 열고정을 제대로 안해서 균체가 유실 되었을 것이다. 열고정을 함으로써 균체를 슬라이드 표면에 고정시켜 실험 도중 균체의 유실을 막을 수 있는데, 처음 바실러스균을 그람 염색 실시한 현미경 사진의 결과를 보면, 관찰된 균체의 수가 다른 사진에 비해 현저히 감소었으며, 이는 열고정을 제대로 하지 않아 일어난 실수임을 알 수 있다. 염색 또한 거의 되지 않았는데, 염색이 되지 않은 원인은 여러 가지가 있지만, 이 역시 열고정을 제대로 하지 않았기 때문이라고 생각한다. 열고정은 균체를 고정시킬 뿐아니라 세포막의 인지질 유동층을 키워서 세포로 시약의 투과가 용이해지는 효과도 있기 때문이다.
그람 염색 두 번째 실험에서 바실러스 균이 붉은색으로 염색된 이유
여러 가지 원인을 추측할 수 있는데, 첫 번째 원인으로는 에탄올로 탈색하는 과정에서 문제가 생겼을 것이다.
이 원인이 가장 가능성이 높은데 그 이유는 에탄올로 탈색하는 과정이 아주 중요하기 때문이다. 에탄올을 너무 과량 사용해서 탈색을 하게되면 crystal violet 마저 같이 씻겨내려가기 때문이다. 만약 에탄올로 crystal violet까지 모두 제거시켰다면, 후에 safranin으로 도말하기 때문에 붉게 보이는 것은 당연한 결과다.
두 번째 원인으로는 실험 도중 균이 오염되었을 것이다. 실험 전 과정은 클린벤치에서 실험한 것이 아니기 때문에 공기 중에 떠돌아다니는 부양균이나, 낙하균, 진애(티끌이나 먼지)에 의해 충분히 오염될 소지가 있다.
뿐만 아니라 실험 과정(세척하는 과정, 수분 제거 과정 등)에서도 오염될 가능성이 있다.
세 번째 원인으로는 24시간 이상 배양된 균을 사용했을 수도 있다. 대수기가 아닌 정상기나 사멸기 상태로 오래된 세균은 그람양성균이 그람음성균처럼 염색될 수 있다고 한다.
네 번째 원인으로는 세균 자체의 특성이다. 그람 양성균도 crystal violet을 세포내에 가두는 능력이 개체마다 차이가 있어 쉽게 잃어버리는 그람양성균은 그람음성균처럼 될 수도 있다. 이 원인 때문에 세 번째 현미경 사진에서 일부 균들만 보라색으로 염색되어 관찰된 것일 수도 있다.
비록 실험 결과는 예상과 많이 다르게 나왔지만, 염색 색깔에 따라 균의 종류를 구별하고, 예상과 다른 결과 덕분에 더 폭넓은 지식을 얻게 되었다.
8. 참고문헌
미생물학 실험(고려의학) : 62p~93p
미생물학 실험(신광문화사) : 31p~39p
미생물학 실험법(保文閣) : 75p~87p
Benson's 미생물학 실험(지코사이언스) : 101p~104p
미생물학 실험 - 기초와응용(월드사이언스) : 52p~60p
http://krdic.naver.com/detail.nhn?docid=27883900
http://100.naver.com/100.nhn?docid=61760
http://blog.naver.com/diy2chn?Redirect=Log&logNo=140094074717
http://blog.naver.com/djquid?Redirect=Log&logNo=50096279592
http://cafe.naver.com/makesmap.cafe?iframe_url=/ArticleRead.nhn%3Farticleid=73741
http://blog.naver.com/acid_base?Redirect=Log&logNo=70101415303
실험 오류의 원인 : http://blog.naver.com/loveda01?Redirect=Log&logNo=80038467325

키워드

병원미생물학실험,   병미실험,   병미,   단순염색,   그람염색,   그람양성균,   그람음성균