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본문내용
디고 파괴되지 않는 DNA 중합효소<수 종류의 내열성 DNA Polymerase가 시판되고 있는데 반응에 사용하는 완충액의 조성이 다를 수 있으므로 주의가 필요하다. TaKaRa Taq을 사용할 때 DNA합성의 최적온도는 대개 70~80℃이고 그 합성속도는 60 nucleotides/초 이상이다. 활성 반감기는 92.5℃에서 130분 이상, 95℃에서 약 40분, 97.5℃에서 약 10분간이다.>
거의 중성 pH를 유지해주는 염과 완충액
DNA template
-PCR증폭은 일련의 단계가 주기적으로 반복되는 반응이다
첫 단계는 DNA주형의 두 가닥을 단일가닥으로 분리하도록 거의 끓는점 가까운 온도로 반응물을 가열하는 것이다.<첫열변성 과정은 1-9분간 94-97℃ 사이의 열을 가하여 두 가닥의 DNA (dsDNA) 사슬을 한 가닥(ssDNA)으로 분리한다. 이 때 DNA 두 가닥 사슬 사이의 상보적인 염기대를 유지시키고 있는 수소결합이 제거된다. >
다음 단계는 반응물의 온도를 낮춰서 프라이머가 주형가닥에 결합하게 만든다. <시발체의 결합과정은 55~65℃로 온도를 낮추어ssDNA 주형에 시발체가 상보적 염기순서에 결합하는 과정인데 적정온도는 주형 DNA와 시발체의 염기배열에 따라 달라진다.>
그 다음 단계로 DNA 중합효소가 새로운 상보가닥의 합성을 촉매할 수 있도록 최적의 온도로 반응물의 온도를 올려준다.<중합반응은 약간 열을 올려서 DNA 중합효소와 3\'dNTP를 이용하여DNA를 합성하는 과정이다. 시발체가 붙은 직후의 주형 DNA로부터 5\'에서 3\' 방향으로 주형 DNA의 염기순서에 상보적인 새로운 염기순서를 합성하여 DNA 사슬을 연장시킨다.>
한 주기가 진행되어 표적 DNA 서령
거의 중성 pH를 유지해주는 염과 완충액
DNA template
-PCR증폭은 일련의 단계가 주기적으로 반복되는 반응이다
첫 단계는 DNA주형의 두 가닥을 단일가닥으로 분리하도록 거의 끓는점 가까운 온도로 반응물을 가열하는 것이다.<첫열변성 과정은 1-9분간 94-97℃ 사이의 열을 가하여 두 가닥의 DNA (dsDNA) 사슬을 한 가닥(ssDNA)으로 분리한다. 이 때 DNA 두 가닥 사슬 사이의 상보적인 염기대를 유지시키고 있는 수소결합이 제거된다. >
다음 단계는 반응물의 온도를 낮춰서 프라이머가 주형가닥에 결합하게 만든다. <시발체의 결합과정은 55~65℃로 온도를 낮추어ssDNA 주형에 시발체가 상보적 염기순서에 결합하는 과정인데 적정온도는 주형 DNA와 시발체의 염기배열에 따라 달라진다.>
그 다음 단계로 DNA 중합효소가 새로운 상보가닥의 합성을 촉매할 수 있도록 최적의 온도로 반응물의 온도를 올려준다.<중합반응은 약간 열을 올려서 DNA 중합효소와 3\'dNTP를 이용하여DNA를 합성하는 과정이다. 시발체가 붙은 직후의 주형 DNA로부터 5\'에서 3\' 방향으로 주형 DNA의 염기순서에 상보적인 새로운 염기순서를 합성하여 DNA 사슬을 연장시킨다.>
한 주기가 진행되어 표적 DNA 서령
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- 페이지수7페이지
- 등록일2013.10.25
- 저작시기2013.3
- 파일형식한글(hwp)
- 자료번호#887828
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