Ex3_Bradford_Assay (Protein_정량)

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Ex3_Bradford_Assay (Protein_정량)에 대한 보고서 자료입니다.

본문내용

발생한 것 같다. 이번실험에서 우리는 Bradford 시약이 15ml가 필요했지만 만약을 대비해 20ml를 만들었다. 5X Bradford 시약을 1X로 희석해야 했기 때문에 물 16ml+Bradford 4ml를 혼합했다. 그런데 우리조는 정량을 잘못해서 20ml가 조금 넘었다. 이 또한 실험 오차의 원인 중 하나일 것으로 생각된다. 파이펫을 사용할 때도 주의해야 한다. 정량하는 것이기 때문에 e-tube 15개에 동일하게 정확히, 15개에 1ml씩 넣어줘야 하므로 tip에 뭍은 양까지 고려를 해줘야 한다. 그래서 loading을 시작하기 전 1~2번 파이펫팅을 한 후 e-tube에 넣어준다. 정량 할 때는 농도를 정확하게 하는 것이 중요하기 때문에 한사람이 쭉 파이펫팅을 하는 것이 좋다. 사람마다 조금씩 파이펫팅 습관이 다르기 때문이다. 실제로 우리조는 여러명이서 파이펫팅을 나눠서 하는 바람에 실험 결과의 오차가 크게 났다. 실험결과를 살펴보면 우리조의 STD-1㎕에서 STD-1㎕과 STD-0㎕의 차이가 거의 없었다. 한사람이 모두 파이펫팅을 한 것이 아니라 여러명이 분배를 해서 파이펫팅을 하는 바람에 정량에서 오류가 났을 것으로 예상 된다. 혹은 BSA를 넣는 과정에서 양이 매우 적어서 들어가지 않는 오류가 있었을 것으로 추측한다. 그리고 P.M e-tube가 얼은 상태이기 때문에 다 녹여주는 것이 중요하다. P.M은 농도가 높기 때문에 2㎕만 넣어주고, 나머지는 농도가 낮기 때문에 10㎕를 넣어준다. 또한96 well plate의 밑바닥에 지문이 묻지 않도록 주의한다. 나중에 uv를 쐴 때 지문이 방해가 될 수 있기 때문이다. 96 well plate에 200㎕씩 넣을 때 기포가 생기면 값이 튈 수 있으니까 tip 끝에 남아있는 것은 다 넣어주지 않는다. 세 번 모두 똑같은 상태에서 loading을 하는게 중요하기 때문이다. 그래서 loading을 하기 전에도 1~2번 파이펫팅을 해줘서 기포를 빼준다. 그리고 실험에서 blank를 만들어 주는 이유는 Bradford시약의 자체색이 있기 때문에 비교해 주려고 만드는 것이다. BSA는 온도에 민감하므로 손으로 만지지 않도록 주의한다.
Reference
생물학실험서/ 민철기, 강창수 저/ 라이프사이언스/ 31~33page
실험생화학(개정3판)/ 한국생화학회 저/ 탐구당/ 205page
생물공학실험서/ 한국생물공학회편/自田 아카데미()/ 28~29page

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