2.순수배양 미생물의 기본형태

소개글

2.순수배양 미생물의 기본형태 에 대한 보고서 자료입니다.

목차

1.실험주제
2.실험목적
3.개요
4.실험방법
5.실험 결과
6.고찰
7.출처

본문내용

수 있기 때문에 동결보호제로
서 세포주위를 둘러싸서 세포를 보호하여 보존을 용이하게 하기 위해서이다. 마지막으로 de
ep Freezer에 넣어 -80℃에서 동결보존 시킨다.
희석은 10, 10, 10배수로 희석시켜주는데 미생물 배양액이 3개이므로 각각의 배양액
을 모두 희석해주어야 한다. 우리 조는 이를 착각하여 실수를 할 뻔 하였다. 먼저 원액 1ml
에서 990㎕ 증류수와 10㎕원액을 넣어 10²희석액을 만든 다음 990㎕증류수와 10㎕ 10² 희석액을 넣어 10⁴희석액을 만들어 준다.
10 = 990㎕ 증류수 +10㎕ 10⁴희석액
10 = 900㎕ 증류수 +100㎕ 10 희석액
10 = 900㎕ 증류수 +100㎕ 10 희석액
희석을 시킬 때 주의 할 점은 10㎕은 양이 적기 때문에 용기벽면에 흘려 넣어 주게 되면 배양액이 잘 섞이지 않아 배양이 잘 되지 않을 수 도 있다. 그러므로 증류수 안에 피펫의 끝을 담구고 pipetting을 해주어야 한다. 희석된 배양액 500㎕를 피펫으로 떠서 배지에 분주하고 Overlay를 해주는데 Overlay는 배양액을 배지에 뿌리고 손으로 퍼트려서 도말
하는 방법으로 단시간에 샘플을 여러 개 퍼트릴 수 있다는 장점이 있다. 나는 아직 서툴기 때문에 Overlay가 단시간에 도말이 가능하다는 말을 이해하지 못했지만 조교님의 Overlay
를 보니 Spreading을 통해 도말을 하는 것보다 Overlay가 더 편리하겠다는 생각이 들었다. Overlay를 할 때 주의할 점은 느리게 Overlay를 하면 다른 부분이 마르게 되어 배양이 되
지 않을 수 있기 때문에 빠르게 Overlay하고 마르지 않게 마지막에 전체를 다 덮어 주고 15분 정도 뚜껑을 열어 건조시킨 뒤 뚜껑을 닫는다. 우리 조는 Overlay가 골고루 잘 되지 않아 E.Coli배지의 경우 군데군데 배양이 되지 않은 부분이 보인다. Overlay를 하고 남은 배양원액은 Streaking 해주는데 Streaking을 하는 이유는 순수 배양한 미생물이 오염되지 않고 제대로 분리되었는지를 확인하기 위해서 이다. 처음 미생물이 혼합된 배지에서는 보이
지 않는 잡균이 많이 섞여 있게 되는데 Streaking을 하여 마지막 4획의 미생물집락을 통해 순수배양이 제대로 되었는지를 확인 할 수 있다.
마지막으로 미생물을 분리하여 배양한 배지의 균 수를 Cellcounting 하여 희석배수와 균 수를 통해 원액의 균의 수를 추정할 수 있다. 예를 들어 10희석액에서 배양된 균의 수가 34개이면 이번 배양배지는 500ml를 만들었으므로 원액1L의 배양배지에서 배양된 균의 수
를 구하면 10(1L) = 34×2×10 cfu/ml가 된다. 이때 사용하는 균의 수는 30~300사이의
것으로 30이하이거나 300이상이면 사용하지 않는다.
이번 실험에서는 순수배양에 대하여 실험하였다. 지난번 토양균 Streaking과 비슷한 이론
과 공통점이 많아 실험이론을 이해하는 데는 어렵지 않았지만 3일에 걸쳐해야하는 실험을 하루 만에 다 하려고 하니 약간은 버겁기도 하고 실수도 많았던 것 같다. 또한 실험과정도 길고 여러 가지를 한 번에 하다보니 의문점이 많이 생기게 되었다. 첫 번째로, 배지를 만들 때 배지의 구성성분을 넣고 섞어주었는데 이때 magnetic stirrer라는 것이 어떻게 작용하는
지가 궁금하였다. magnetic stirrer란 자석교반기라고도 불리며 시약이나 배지를 만들 때 내용물에 magnetic bar를 넣어주어 가동을 시키면 자석이 작용하여 자동으로 섞이게 된다. magnetic stirrer를 사용할 때 유의할 점은 용기를 올려놓은 부분이 뜨거워지게 되는데 단
백질과 관련된 실험을 할 때는 단백질은 열에 의해 변성되므로 주의해서 조작하여야한다. 두 번째로, 동결보존에서 주의해야 할 사항과 동결보존한 것을 해동할 때가 궁금하였다. 먼
저 주의 사항은 미생물의 종류에 따라 글리세롤의 농도가 달라져야 한다. 글리세롤의 농도
를 제대로 맞추지 않으면 어떤 미생물은 글리세롤에서 살아남지 못해 죽게 될 수도 있기 때문에 저장하기 전에 생존율 테스트를 해보는 것도 좋은 방법이다. 다음으로 동결보존의
해동은 얼음안에서 천천히 녹인 뒤 배양액을 넣고 원심분리하여 세포만 분리한 뒤 다시 배양액을 넣어 원심분리 해준다. 그리고 우리 조의 실험결과가 생각했던 것 보다 잘 나오지 않은 것 같아 아쉽다. 특히 Overlay를 나름 꼼꼼하게 하였다고 생각했는데 실제 배양된 것
은 균 수도 적고 군데군데 배양이 되지 않은 부분이 보여서 배양된 것을 보고 약간 실망하
였지만 순수배양이라는 타이틀에 맞게 3가지의 미생물이 오염되거나 섞이지 않고 제대로
분리배양된 것 같아 안심이 되었다. 하지만 내가 육안으로 보는 미생물의 배양상태와 실제
는 다를 수 있기 때문에 다음 실험인 그람염색을 통해 내가 분리한 미생물이 제대로 순수
분리가 되었는지 빨리 확인하고 싶다.
7.출처
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-대구보건대학 임상병리학과 ppt
-충북대학교 생체모방과학연구실

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