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ac.kr/biochem_workshop/restriction_enzyme.php
http://biochemistry.yonsei.ac.kr/biochem_workshop/DNA_ligation.php 1. 실험제목
2. 실험목적
3. 실험원리
1) 플라스미드의 정의
2) Plasmid의 특징
3) 플라스미드 분리 및 정제 방법
4)PCR
5) 제한효소
6) ligation of DNA
4
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DNA가 침전되며 침전된 DNA를 적당한 완충용액에 녹임으로써 플라스미드 DNA를 정제할 수 있다.
혹은 이온 교환 크로마토 그래피 법을 이용하여 보다 순수한 plasmid DNA를 정제할 수도 있다. (Plasmid DNA 분리 &
농도 측정 &
electrophorosis
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DNA의 농도를 산출한다. 한편 단백질이 강하게 흡수하는 280nm에서의 흡광도를 측정하여 A260/A280의 비를 계산함으로써 단백질에 의한 오염상태를 추정할 수 있다.
3) DNA electrophorosis
분리한 plasmid DNA를 agarose gel에서 전기를 걸어 분리하면 크기
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DNA의 절편을 만든다.
이 중 상보적 부분을 가진 DNA절편이 재조합하기가 쉬워 간단한 DNA의 합성에는 이것을 흔히 이용한다.
적당한 제한효소가 없을 때에는 기계적 절단방법을 이용하기도 한다. DNA의 단편을 플라스미드에 연결할 때에는 DNA를
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DNA를 분리하여 시험관에서 둘 중 한 가지 RNA 전사효소를 이용하여 전사시키면 각 방향의 RNA를 순수하게 생산할 수 있다.
그림 4-11 1. 플라스미드 벡터
2. 파아지 벡터
3. 람다 파아지 벡터
4. 코스미드
5. M13 파이지 벡터
6. 파아지
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플라스미드와 상관관계가 있다. 이 플라스미드에서 제한효소부위는 보존되지 않지만, 대형 플라스미드는 서로 상당한 DNA 상동성을 갖고 있다. 플라스미드가 없는 EIEC는 비침입성이지만 S. flexneri의 대형 플라스미드는 침입성을 갖고 있다.
이
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DNA(total cell DNA)이며 클로닝될 유전자를 얻기 위해 필요.
1-1. Total cell DNA의 분리
2. 제 2 타입은 순수한 플라스미드 DNA이며 분리방법은 기본적으로 total cell DNA분리와 같지만 어느 단계에서는 염색체 DNA와 분리되어야 한다.
2-1. 플라스미드 DNA의
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Date
2010년 10월 7일 ~ 14일
Subject
Plasmid DNA 분리와 젤 전기영동, 그리고 DNA 정량
Purpose & Introduce
E.coli로부터 plasmid DNA를 분리하는 방법을 익히고, 전기영동의 원리에 대해 알아보고 실험해보며, DNA정량 하는 법을 배운다.
Plasmid DN
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Plasmid DNA의 크기를 확인 한다.
5. 참고 문헌
- https://cafe.naver.com/biofactacademy/76 (바이오팩트 공식 학술카페) - Plasmid prep
- [네이버 지식백과] 플라스미드 [Plasmid] (분자·세포생물학백과)
- 김명원 외 9명, 생명과학 개념과 현상의 이해, PEARSON, 186pag
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DNA와는 별도로 존재하기 때문에, plasmid DNA 분리는 염색체 DNA가 포함되지 않게 분리하는 방법이 사용된다.
Ⅵ. 참고 문헌 (Reforence)
나노헬릭스, Reliable Partner for DNA Technology, 플라스미드 (Plasmid) DNA 분리, 2013.12.03
https://m.blog.naver.com/nanohelix/7018038572
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