|
된 대장균에 plasmid DNA를 넣는 방법으로는 chemical method이 있는데 Chemical method는 보통 CaCl2를 사용하여 대장균 세포막의 DNA 투과성을 증가시키는 방법이다. 전기영동으로 알아보는 뿐만 아니라 이렇게 실험해서 결과를 알아보고싶다.
원심분리
|
|
|
세포는 totipotent한 세포이기 때문에 체외에서 이들 세포에 동형조합방식에 의한 gene targetting으로 gene transfer를 시켜서 원하는 clone을 만들어 다시 수정란에 주입하여 형질전환된 동물이나 chimera를 만드는 방법.
1) Stem cell의 특징
(1) Totipotent (전
|
|
|
유전자(혹은 특정 염기서열을 갖는 DNA 조각)를 어떤 생물로부터 분리하여 플라스미드(plasmid)나 파아지 운반체(phage vector)에 삽입시켜 재조합 DNA(recombinant DNA)를 만들 수 있다. 이를 숙주세포에 도입하여 대량 배양하여 운반체를 추출 분리하면
|
|
|
. )
(주의: NC는 반짝이는 면이 Gel과 닿아야 한다)
3) NC위에 filter를 1장 덮고, 스폰지 2장을 마찬가지로 transfer buffer에 적셔 덮는다.
* Gel을 한 장만 쓸 때
+ Blotting pad
Blotting pad
Filter paper
Transfer membrane
Gel
Filter paper
Blotting pad
- Blotting pad
(단, Gel 한
|
|
|
하여 lac operon유전자로부터 떼어내게 되고 이어서 단백질의 합성이 일어나게 된다. 이때 쓰이는 allolactose를 inducer라 하고 이와 비슷한 구조를 가지고 같은 기능을 보이는 화합물 중 대표적인 것이 바로 IPTG이다. 즉, IPTG는 lac operon에서 β-galactosi
|
|
|
에 replica하여 recombinant를 확인한다.
< 참고문헌 >
1. Cooper, Geoffrey M., 1997, The Cell : A Molecular Approach, ASM Press
2. Drica, Karl, 1992, Understanding DNA And Gene Cloning : A Guide For The Curious, 2nd Ed., John Wiley & Sons, Inc.
3. 대표저자 박상대, 1998, 분자세포생물학,
|
|
|
Plasmid vector
Gene cloning에 Plasmid vector가 사용되는 이유
1) 세포 내에서의 자가복제(self-replication)기능
박테리아 세포 내에는 박테리아가 고유하게 가지고 있는 chromosomal DNA는한 세포당 하나밖에 있을 수 없다. 그런데 vector는 복제하여 수많은 cop
|
|
|
luidity에 관여하여 DMSO나 Mg2+가 cell membrane을 변화시키면 낮은 온도로 인해 phophsohlipid bilayer의 fatty acid의 fluidity가 감소하게 되고 변화된 형태를 유지하게 됨으로써 효율성이 높아지는 것이 아닐까 추측해 보았다.
* Heat shock 방법 말고 electroporatio
|
|
|
형질전환식물체의 환경안전성 평가기술 개발과제 최종보고서”, 과학기술부, 2002.
경실련, “유전자변형식품(GMO)에 대한 소비자 설문조사결과”, 경실련 소비자정의센터, 조사기간 : 2014년 8월 18일부터 8월 29일까지.
권오희, “GMO특허현황분
|
|
|
리는 LexA를 잡고 있는 BD domain과 AD가 상호작용하게 되면 LacZ가 transcription 되어 β-galactosidase가 발현되어 X-gal을 분해하기 때문에 X-gal stanning에 의해 Blue colony가 나타나는 것이다. 이때 Blue colony와 White colony에는 A라는 물질의 첨가(+), 또는 비첨가(
|
|
메뉴펼치기
