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Transformation (using heat shock method)
ⓐ -80℃에서 보관한 competent cell을 ice에서 2~3min 넣어 녹임.
ⓑ clean bench에서 competent cell 100㎕을 따서 plasmid(vector) 10㎕에 넣고
tapping하고 ice에서 40min 대기.
⇒ competent cell : plasmid = 10 : 1. 이보다 클 경우 효율 낮아짐
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을 알게 되었다. 또 tip 또한 파이펫의 종류에 따라 틀려진다는 것
을 알았다.
- 이 실험을 통해서 DNA 변환이 어떻게 이루어지는지 알게 되었다.
- 벡터(vector) : 플라스미드(플라스미드 : 세균에 기생하고 있는 작은 고리모양의
DNA로 2중나선구조
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DNA
Fig 11. BL21
- DNA를 삽입하기 쉽게 하기 위해 미리 처리된 E.coli competent cell이다. 일반 균주보다 단백질 분해효소를 더 적게 발생시키도록 돌연변이화한 균주이기 때문에 단백질 생산에 적합하다.
Fig 12. 재조합 DNA
- 제한효소를 이용해 eGFP 와
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없어야 한다. Microcarriers가 준비되면 여기에 목표하는 DNA(유전자)를 입힌 후 발사장치(보통 Bio-rad회사에서 만든 PDS-1000이 일반적으로 이용되나 원리는 간단하므로 직접제작하여 이용하는 경우도 있다.)에서 헬리움 가스의 압력으로 목표 세포
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렴 쌍구균에게 주어 형질전환 시켰다라는 생각을 가졌지만 제대로된 이해를 하지 못했고 이후 DNA가 그물질임을 알게 되었다. 그리고 분자유전학의 전환점이 되었다. 그당시 DNA 보다는 단백질이 유전정보를 담고 있기에 더 적합하다는 생각을
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Plasmid vector
Gene cloning에 Plasmid vector가 사용되는 이유
1) 세포 내에서의 자가복제(self-replication)기능
박테리아 세포 내에는 박테리아가 고유하게 가지고 있는 chromosomal DNA는한 세포당 하나밖에 있을 수 없다. 그런데 vector는 복제하여 수많은 cop
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와준다. 이 과정 역시 세게 흔들면 안 되는데 chromosomal DNA가 나오게 되면 앞으로의 과정에서 플라스미드와 따로 분리해 낼 방법이 없기 때문이다. buffer3를 넣어 pH를 7로 복구가 되면 크기가 작고 supercoiled form을 유지하고 있던 플라스미드는 비
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DNA가 운반되어서, 수일 내에 mg 단위의 재조합 단백질을 생산한다. 바이러스 이용 벡터는 연구자들의 관심을 끌게 되었는데, 이는 바이러스 감염은 신속하고 전신적이며, 감염 세포는 많은 양의 바이러스와 바이러스 유전자 생산물을 획득할
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포로 유전자를 삽입하는 것에는 미세주입이라는 다른 방법이 필요하다. 식물세포와는 다른 동물세포에서 유전자를 발현시키기 위해 수정란이나 아주 초기의 배는 미세주입으로 형질전환된다. DNA는 아주 미세한 피펫에 의해 동물세포의 핵으
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