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Date
2010년 10월 7일 ~ 14일
Subject
Plasmid DNA 분리와 젤 전기영동, 그리고 DNA 정량
Purpose & Introduce
E.coli로부터 plasmid DNA를 분리하는 방법을 익히고, 전기영동의 원리에 대해 알아보고 실험해보며, DNA정량 하는 법을 배운다.
Plasmid DN
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Plasmid DNA 분리 (이온 교환 크로마토 그래피)
형질전환 된 E.Coli cell로부터 plasmid DNA를 재분리 하고자 하는 실험으로서, plasmid preparation method에는 alkali lysis법, boiling법, 효소 분해법 등이 있다.
형질 전환 균주가 갖고 있는 플라스미드에 존재
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Plasmid DNA의 크기를 확인 한다.
5. 참고 문헌
- https://cafe.naver.com/biofactacademy/76 (바이오팩트 공식 학술카페) - Plasmid prep
- [네이버 지식백과] 플라스미드 [Plasmid] (분자·세포생물학백과)
- 김명원 외 9명, 생명과학 개념과 현상의 이해, PEARSON, 186pag
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ac.kr/biochem_workshop/restriction_enzyme.php
http://biochemistry.yonsei.ac.kr/biochem_workshop/DNA_ligation.php 1. 실험제목
2. 실험목적
3. 실험원리
1) 플라스미드의 정의
2) Plasmid의 특징
3) 플라스미드 분리 및 정제 방법
4)PCR
5) 제한효소
6) ligation of DNA
4
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DNA 분리와 plasmid DNA(pBR322) 분리
Abstract - 본 실험에 대한 간략한 요약
I. Introduction - 실험에 대한 원리와 배경, 목적등을 기술
II. Method - 실험에 사용한 재료, 기구, 방법등을 기술
III. Result - 실험 결과를 기록
IV. Conclusion & Discussion - 실험 결
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분리하여 수용액 층과 유기용매 층을 분리한다.
Phenol은 pH8.0 인 Tris-Cl 용액으로 평형시킨 후 사용하여야 한다. 그것은 phenol의 pH가 8.0이면 유기용매 층과 수용액 층 사이에 DNA가 걸려 채취하기 곤란한 경우를 방지 해 주기 때문이다.
6) 수용액
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박테리아 배양과 수확
세포가 피괴되면서 내용물 유리
DNA를 제외한 모든 성분 제거위해 세포추출물 처리
DNA 용액농축 세포전체 DNA
세포 전체 DNA의 준비
플라즈미드 DNA
플라즈미드 DNA정제
파아지 DNA
박테리오파아지 DNA제법
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마이크로 피펫을 사용하여 겔로 loading한다. (각 샘플loading 시 새로운 팁으로 교체하며 피펫이 gel을 뚫지 않도록 빠르고 정확하게 넣는다)
3. DNA시료를 넣어준 comb 쪽은 (-)전극, 반대편은 (+)전극으로 전압을 걸어 30~40분간 100V로 전기영동을 시작
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. 그부분도 굉장히 시간맞추기가 어려웠다.
5. 참고자료
캠벨 생명과학 (9판) DNA편 플라스미드 DNA의 분리(Isolation of Plasmid DNA)
1. 이론
1. 플라스미드 DNA
2. 플라스미드 DNA분리
2. 재료 및 방법
3. 결과
4. 고찰
5. 참고자료
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DNA분리 방법과의 차이를 알아보고, plasmid DNA분리 방법에는 어떠한 것이 있는가를 알아본다.
plasmid DNA분리는 주로 miniprep이라고 부르는 방법으로 plasmid DNA를 소량 분리하는 방법이다.
플라스미드를 정제는 total cell DNA를 일반적인 분리방법과
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