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Plasmid DNA 분리
centrifuge, e.p tube, column(max 750ul), conical tube, pipette, vortex, collecting tube
2) DNA 농도 측정
UV-Vis Spectrophotometer, Cuvette, pipette, e.p tube, TE 완충용액
3) DNA electrophoresis
Mini gel running kit, UV illuminator, vortex, TAE(tris-acetate) buffer
Microwave o
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plasmid DNA는 20℃에서 보관한다.
3) 전기영동
①Well의 왼편에 size maker를 5ul 넣고 다음 well부터 차례로 loadingdye와 섞은 DNA를 넣는다. (20ul loading)
②전기영동장치의 플러그를 전력공급장치에 연결한 후, 전기를 걸어 20~30분간 전기영동을 한다.
③
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1. Purpose
2. Introduction
3. Material & Supplies
4. Procedure
◎ Plasmid 분리 실험
◎ Agarose gel을 이용한 plasmid 전기영동
5. Result
◎ Plasmid 분리 실험
◎ Agarose gel을 이용한 plasmid 전기영동
6. Discussion(자필)
7. Refrence
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1. 운반체로서의 plasmid란 무엇인가?
2. 분자유전학적 관점에서의 plasmid의 용도와 그 기능을 간략히 서술하시오.
3. Plasmid 구조(형태)에 대해 서술하시오. (그림포함)
4. 자신의 DNA gel 사진을 첨부하시오.
5. Gel 사진을 보고 Uncut DNA, Vector, I
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plasmid isolation
3.전기영동(Electrophoresis)에 의한 DNA분리
4. 제한효소 (restriction enzyme)
5. E.coli : transformaion
6. 접합(Conjugation)
7. Transduction 형질도입-> bacteriophage
8. PCR(Polymerase Chain Reaction)
9. RNA isolation / DEPC solution / 주의점
10. Protein expression / SDS-Pa
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ote인지, homozygote인지를 구별 할 수 있었다.
실험이 성공적으로 이루어져 깔끔한 상태의 결과를 확인할 수 있었고, 어떤 것이 자식 오염주인지 전기영동 결과를 통해 알 수 있었다. 한 개의 종자(4번)만이 대립되는 두 allele을 갖지 못하여, 1개의
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전기영동을 이용하여 단백질과 DNA의 크기를 측정하는 네 번째 실험에서 α-synuclein의 크기는 38.619kd, LDH의 크기는 22.039kd였고 DNA중 하나는 초나선구조, 하나는 선형구조를 갖는다.
먼저 단백질은 SDS-PAGE를 이용하여 크기를 구했는데 SDS는 계면
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경우 효소에 의해 다시 잘려, agarose gel로 전기영동 하였을 때 vector와 insert, 이렇게 2 band로 나오는 것을 이용한 것이다.
DNA
10㎕
10×H buffer
2㎕
NdeⅠ
1㎕
XhoⅠ
1㎕
DDW
6㎕
total
20㎕
다시 PCR로 확인해 보았다.
premix에 다음과 같이 넣고 PCR을 했다.
DNA
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mid가 가진 항생제 내성을 가질 수 있다. 따라서 항생제 배지에서 키움으로 써 plasmid가 숙주에 잘 들어갔는지 확인할 수 있다. 우리 실험에서 pGEM-T easy vector는 ampicillin에 내성이 있기 때문에 LB agar 배지에 ampicillin을 깔고 conformation된 E. coli들을
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