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DNA에 Primer를 낮은 온도(50-65도)에서 결합 시킨 뒤(Annealing), 72-75도에서 Polymerase가 Primer로부터 DNA를 합성하는 세가지 단계를 반복적으로 기계를 이용하여 시행함으로써 증폭된 DNA를 얻게 된다. 이 때 사용되는 Polymerase는 고온에서 번식하는 Taq (T
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Taq polymerase는 들어 갈 때 아지랑이처럼 나타나는 것을 확인하여 들어갔는지 유무를 확인 했다. 그리고 PCR을 한 후 전기영동으로 확인했다. 한 부분의 단편 DNA의 증폭을 한 것이기 때문에 전기영동 결과가 하나의 밴드만 진하게 형성이 되어야
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- 그러나 혼합 primer or mismatch를 갖는 primer를 사용할 경우는 37~45 ℃로 annealing 온도를 낮출 필요가 있다.
(3) Extension(신장반응) PCR 정의
PCR 증폭효율에 영향요인
PCR 반응조건
반응액의 조성
Taq(Taq polymerase)
Agarose gel electrophoresis
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aq polymerase는 그 기능은 유지한다. 그리하여 PCR시 Taq polymerase를 사용한다.
우리는 35번의 cycles을 돌려 얻고자 하는 DNA를 증폭시켰다. 각 Cycle이 돌아지면서 각 과정마다 원하는 온도가 있다. 95℃에서는 주형 DNA를 변성시켜 이중나선을 풀어준다
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DNA보다 훨씬 PCR이 잘되며 일반적으로 50-500bp 정도
의 길이가 가장 수월하게 증폭된다.
- Protease 같은 단백질이 sample DNA에 많으면 PCR을 시작하기 전에
에서 5분간 끓여 효소를 불활성화 한 후 PCR을 시작한다.
5) MgCl2
- Taq polymerase의 작용을 위해서
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DNA fragment를 숙주로부터 뽑아내고, 증폭하고, 안전한 장소에 보관 하는 실험 기술을 배울 수 있었다.
Reference
MicrobeWiki // 2014.10.28. // Fusarium graminearum // MicrobeWiki // microbewiki .kenyon .edu(Classification, Pathology)
Broad Institute // 2014.10.28. // F. graminearum PH-1
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