플라스미드 DNA의 분리 및 제한효소 절단과 Agarose Gel 전기영동 실험 실습

소개글

플라스미드 DNA의 분리 및 제한효소 절단과 Agarose Gel 전기영동 실험 실습에 대한 보고서 자료입니다.

목차

목차
1. 서 론

2. 실험 방법
2.1. LB Agarose 배지와 LB Broth 제조 및 멸균
2.2. LB-Ampicilin 첨가
2.3. E. coli JM109 (pGEM-T-Easy-DXS, pBlueScript-KS(+)) 접종
2.4. Plasmid 분리
2.5. 제한 효소 절단
2.6. Agarose Gel 제작
2.7. 전기영동 및 DNA 확인

3. 결과
3.1. E. coli JM109 배양 확인
3.2. 제한효소 절단
3.3. Agarose Gel 준비
3.4. 전기영동 준비 및 실행
3.5. 전기영동 결과 확인

4. 고찰

참고문헌

본문내용

6μl와 시료 10μl를 well에 loading 하고 100V에서 전기영동을 수행한다. DNA loading dye의 이동거리를 확인하여 적절한 위치에서 전기영동을 멈추고 UV transilluminator를 이용하여 DNA를 확인한다.
3. 결과
3.1 E. coli JM109 배양 확인
streaking 한 모양대로 잘 배양이 된 모습을 확인했다(Fig 2). streaking을 겹쳐서 하는 이유는 streaking하면서 점점 미생물 밀도가 낮아질 것이므로 single colony를 얻기 쉽기 때문이다.
Fig 2. colony 배양이 잘 된 모습
3.2 제한효소 절단
푸른 색을 띄는 EcoR I를 DXS와 SK에 0.5μl 넣고 반응 시켜 제한 효소 작용으로 절단 시킨 모습(Fig 3). 눈에는 보이지 않고 워낙 미량을 주입하기 때문에 집중해야 했다. 그리고 원심분리를 통해 가라앉혀서 피펫으로 취하기 쉽게끔 한다.
Fig 3. Eco R I를 처리하고 원심분리 한 모습
3.3 Agarose Gel 준비
시료를 넣고 가열 후에 식으면 혼합 시에 거품이 생기지 않도록 주의 하고 Gel을 굳힌다(Fig 4).
Fig 4. 전기영동 전 Agarose Gel 제작
3.4 전기영동 준비 및 실행
준비된 시료와 size marker를 well에 loading 시킨다. 1,2,3,4 그리고 5번째에는 size marker를 투입한다(Fig 5). 이때 gel이 찢어지지 않도록 주의하고, tip을 chamber에 잘 들어가도록 신경 쓴다. 너무 장시간 소요하면 시료가 다 퍼져버리므로 신속하고 정확하게 투입한다.
Fig 5. well에 시료를 loading한 모습
그리고 뚜껑을 닫은 뒤, 전기영동을 시작한다.
그러면 시료가 왼쪽으로 이동하는 모습을 볼 수 있다. DNA는 눈에 보이지 않기에 색으로 나타나지 않는다. 기다리면 Bromo phenol이 파란색으로서 가장 왼쪽으로 이동하였고, 그 다음으로 Xylene Cyanol의 연청색 모습을 볼 수 있다(Fig 6, 7).
Fig 6. 전기영동으로 이동 중인 모습
Fig 7. DNA loading dye의 이동거리 확인
3.5 전기영동 결과 확인
UV transilluminator로 전기영동 한 결과를 알아본다. 1조는 왼쪽부터 5개이고, 순서대로
SK E.coli, SK, DXS E.coli, DXS, size marker 이다(Fig 8).
Fig 8. UV transilluminator 결과
Fig 9. 1조의 결과만 확대한 사진
Fig 8의 전기영동 사진을 보기 쉽게끔 우리 1조 결과만 확대 하여 분석을 해보면, 먼저 DXS는 3개로 보였는데 절단한 후 역시 3개가 되었다.
절단 전 맨 마지막 밴드는 흐리고 옅은 것으로 보아 부피가 작다는 걸 알 수 있으므로 이번 실험에서 중요치 않은 RNA나 세포 껍질 등의 찌꺼기라고 볼 수 있다. 그리고 상대적으로 진한 위의 두 밴드는 DXS라고 볼 수 있다. DXS가 꼬여 있고 엉켜있기 때문에 모양이 일정치 않으므로 두 개의 DXS 절단 밴드가 생성

키워드

생명공학실습,   플라스미드,   전기영동,   전기영동실험실습