뷰렛반응과 분광법

목차

ㆍ뷰렛반응(biuret reaction)

ㆍ분광법

ㆍ정량분석

ㆍ비색법(比色法)의 원리

ㆍ스펙트럼의 결정 조와 기능

ㆍ분광광도계의 구조와 기능

ㆍ완충용액(緩衝溶液, buffer solution)

ㆍfibrinolytic protease

본문내용

는 7.5에서 8.0사이에 최대 활성을 보였으므로 neutral protease임을 알수있었다.
e. Human fibrinogen 분해
정제된 효소와 human fibrinogen을 함께 처리하여 반응시키면 반응시간에 따라 human fibrinogen의 B 와 r chain이 사라졌다.
f. 기질 특이성
Oxidized insulin B chain을 proteolytic cleavage를 위해 기질로 사용하였을 때, 전 체 10개의 peptide bond가 fibrinolytic protease에 의해 절단되었다.
그것들은 Asn(3)-Gln(4), Leu(6)-Cys(7), Leu(11)-Val(12), Val(12)-Glu(13), Leu(17)-Val(18), Val(18)-Cys(19), Gly(20)-Glu(21), Phe(24)-Phe(25), Phe(25)-Tyr(26). Thr(27)-Pro(28)이였다. 이 효소가 소수성이고 덩치가 큰 잔기들에 특이적으로 반 응함을 알 수 있었다.
2. fibrinolytic protease의 순수분리
a. Ammonium sulfate 분획
위에서 준비된 crude extract에 고체 ammonium sulfate를 최종농도가 80%가 되 도록 첨가한 후, 잘 녹여서 10.000 g에서 40분간 원심분리 하였다. 이로 인해 얻은 침전물을 모아 소량의 buffer A에 녹였다.
b. Gel 여과 크로마토그래피(G-50)
G-50 gel을 column(2 51 cm)에 충진하여 20nM Tris-Cl, pH 8.0으로 평형시켰 다. 위에 농축된 시료를 싣고 난 후, 같은 완충용액으로 용출 시켰다. 활성이 있는 분획을 모아 동결건조 하였다. 얻어진 시료를 증류수에 용해시켜 60 에 서 10분간 열처리를 하여 다시 10,000 g에서 20분간 원심분리를 행하였다. 얻 어진 상층액에 고체 ammonium sulfate를 첨가하여 1.7M 농도가 되도록 만들어 었다.
C. phenyl - sepharose 소수성 크로마토그래피
phenyl - sepharose gel을 column(2 7cm)에 충진하여 1.7M ammonium sulfate 가 포함된 10nM Tris- Cl, pH 8.0 buffer B완충용액으로 평형시켰다. Column을 Buffer A로 용출시켰다. 효소활성이 있는 분획을 모아 동결건조하였다.
d. Gel 여과 크로마토그래피 (G-150)
Sephadex G-150을 column(2.8 105 cm)에 충진하여 20nM Tris-Cl, pH 8.0으로 평형시켰다. 전 단계에서 얻어진 농축된 시료를 column에 싣고 같은 완충용액 으로 용출하였다. 용출속도는 10ml/hr이고 각 분획의 크기는 2ml이었다. 효소활 성이 있는 분획을 모아 동결건조 후, -20 에 보관하였다.
참고문헌
일반생물학실험, 강원대학교생물교재편찬위원회, 강원대출판부,1993, PP.158
현대과학대사전, 한국과학기술진흥출판부,한국과학기술진흥재단,1994,PP.625
생화학, 김태봉저, 탐구당, 1971, PP159-160
임상화학실기, 김종효외 10名, 고문사, 1989, PP. 197-207
생물과학을 위한 기기, M.H.Gordon.R.Macrae, 교보문고,1992, pp.133-143
생화학, 김 일 외2名, 청문각, 1985, PP. 14-15
동아원색세계대백과사전,동아출판사백과사전부,동아출판사,1989,PP.506,
브니태니커, 브니태니커사전부, 브니태니커, 1994, PP.230-232
Pleurotus에 있는 Proteases의 정제와 특성. 신현희. 울산대학교 대학원. 1997

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