gene cloning

소개글

gene cloning에 대한 보고서 자료입니다.

본문내용

galactosidase activity를 띄지 않는다. Lac selection을 통해 (-galactosidase의 유무(non-recombinant는 푸른 colony를 생성한다.)를 알 수 있다.
6. Cloning Vectors for E. coli
여러 cloning vector가 있지만 지난 50년 동안 연구되어 온 E. coli가 purification이 쉽고 high transformants 능률등과 같은 desirable properties등에 의해 가장 널리 사용되고 있다. 가장 대표적인 것이 pBR322(ch.5에 언급)이다.
1) pBR322
(1) size가 4363bp여서 purification이 쉽다. (2) 2 sets의 antibiotic resistance genes을 가지고 있어서 암피실린이나 tetracycline resistance로 slectable maker로 사용 가능하고 insertional inactivation 때문에 다양한 sticky end의 DNA fragments로 사용된다. (3) copy의 숫자를 1000-3000까지 많게 할 수 있다.
- Orgins은 R1의 ampR R6-5의 tetR 이 있다.
2) pBR327 a higher copy number plasmid
(1) pBR322보다 많은 copy를 만든다. (2) biological containment: non-conjugative plasmid를 만드는데 다른 E. coli에 직접적으로 transfer 될 수 없다.
3) pUC8 a Lac selection plasmid
(1) fortuitous: 500-700 copy를 가진다. (2) 한 단계과정으로 세포를 identification하고 recombinat한다. (3) restriction site의 clustering: 2개의 다른 sticky ends를 다른 조작 없이 DNA fragment와 함께 복제할 수 있다.
4) pGEM3Z in vitro transcription of cloned DNA
PUC vector와 비슷하게 ampR와 lacZ’ gene을 가지고 있고 recognition site역할을 하여 RNA polymerase 효소가 이 2가지 promoter에 결합할 수 있다. 매우 active한 효소로 생체 밖에서 transcription을 위해 사용되어 1-2g의 RNA를 합성할 수 있다.

키워드

gene,   cloning,   유전자,   클로닝