바이러스의 배양

본문내용

1
6 well
9.6
2
1
Culture Dishes
35 mm
9.6
2
1
60 mm
21
5
2
100 mm
55
10
5
150 mm
145
20-30
8
Flasks
25 cm2 (T-25)
25
5 - 10
2
75 cm2 (T-75)
75
15 - 30
5
175 cm2 (T-175)
175
30 - 50
8
225 cm2 (T-225)
225
50 - 70
15
Roller Bottles
1250 ml
490
100 - 200
-
2200 ml
850
100 - 250
-
4900 ml
1750
100 - 500
-
f) 에어컨- 온도 조절
g) Inverted microscope- 무염색 세포관찰
h) 액체 질소 보존통
세포의 장기 보존을 위해서는 액체 질소 보존통이 필수품이다. 액체 질소 보존법에는 액 체 질소 용액 내 보존(-196°C)과 액체 질소 증기 내 보존(-120°C)이 있다. 액체질소 용액 내 보존은 액체질소가 동결앰플(ampule) 내에 침투할 경우 바이러스 등의 오염의 원 인이 되고, 해동시에는 앰플내의 액체질소가 기화하여 폭발할 위험이 있다.
h) 기타
가압 증기멸균기(autoclave)- 멸균장치, Deep freezer- 동결 보존, -80℃ 유지
원심분리기- 세포와 배양액의 분리, 냉동 냉장고- 배지, 시약 등의 보존
cover slip- 염색용, autopipette- 분주
혈구 계산판- 세포수 측정
참고>
1> Cell dissociation
1. Shake-off
Mitotic or other loosely adherent cells
2. Trypsin (0.01-0.5% trypsin)
Most continuous cell lines
3. Prewash with balanced salt solution
then 0.25% trypsin
Some strongly adherent continuous cell lines and many cell
lines atearly passage stages
4. Prewash with 1 mM EDTA then 0.25%
trypsin
Some strongly adherent early passage cell lines
5. Prewash with 1 mM EDTA, then EDTA
2nd rinse,andleave on, 1 ml/5 cm2
Epithelial cells, although some may be sensitive to EDTA.
6. EDTA prewash, then 0.25% trypsin
with 1 mM EDTA
Strongly adherent cells, particularly epithelial and
some tumor cells (note; EDTA can be toxic to some cells)
7. 1 mM EDTA prewash, then 0.25% trypsin
and 200units/ml collagenase
Thick cultures, multilayers, particularly
collagen-producing dense cultures
8. Scrape
Alll cultures, but may cause mechanical damage and
usually will not give a single cell suspension
9. Add dispase (0.1-1.0 mg/ml) to medium
and incubate until cells detach
Will dislodge most cells, but requires cetrifugation
step to remove enzyme not inactivated by serum.
May be harmful to some cells
2> Virus 접종을 위한 가검물의 처리
1.가검물을 얼리거나 신선하게 보존하고 얼렸을 경우에는 녹인다.
2.녹이는 과정에서 유발에 넣고 유제를 만든다(잘 부서지지 않을 경우 소독된 해사를 넣고 유제를 만든다.)
3.0.2% Gentamycin - PBS를 유제물의 30% 정도 되게 첨가한다.
4.가검물 유제를 3,00rpm/10분간 원심.
5.무균 용기에 0.45㎛의 무균 filter를 사용하여 여과 후 Label을 붙임.
6.가검재료의 온도가 4℃를 유지한다.
7.계태아에 접종하거나 조직배양에 사용한다.
Discussion
학기가 또 시작되었다. 이번엔 바이러스다. 10주간의 바이러스 실습이 빼곡하게 준비되어 기다린다. 그런 첫 시간이 아마도 앞으로 하게 될 바이러스 실험에서 가장 기본으로 쓰일 내용들에 대해 전반적으로 조사해 공부하며 대강 익히게 하는 것이 이번 실험 보고서의 목표일 듯하다. 조금 어려운 내용들이라도 나중에 진행할 실험에서 알게 될 것이라는 기대를 하며 일단 함께 조사를 하였다. 우선 cell culture에 주안점을 두어, media의 구성성분과, 어떤 바이러스에서 어떤 배지를 쓰는지에 대해 알아보았다. 또한 각각의 cell 과 배지도 연결하여 찾아보았다. 바이러스는 지난 학기에 했던 세균과 달리, host가 있어야 배양될 수 있기 때문에 cell과 media가 더욱 중요한 것으로 보인다. 사실 표 몇 개만 찾으면 된다던 조교님 말씀에 표 몇 개를 찾으려 하였으나 찾기가 그리 수월치 않았다. 아직, 어떤 배지와 바이러스가 중요한지 알지 못하므로 찾아낸 표 중에서 몇몇 중요한 것만 골라내지 못해 본의 아니게 분량이 길어졌다. 그래도 전반적인 학습을 하였다는데 의의를 두고 싶다.
References
http://www.jbilife.com/cellculture.php#a1
http://blog.naver.com/tobi75.do?Redirect=Log&logNo=40003304332
http://home.inje.ac.kr/~lecture/virology/ch3virculture/2001virch3.htm
http://cellbank.snu.ac.kr/KOR/j_mainFrame.jsp
http://home.inje.ac.kr/~lecture/virology/viralglossary/viralglossary.htm

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바이러스,   배양,   세포배지