Alkali lysis method , miniprep

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Alkali lysis method , miniprep에 대한 보고서 자료입니다.

목차

Alkali lysis method

miniprep

본문내용

um acetate, pH 5.2 용액을 1/10 부피로, ethanol을 2.5 부피로 첨가
하고 -20°C나 -70°C에서 20분 이상 둡니다. 이 용액 속에서 핵산은 상당히 안정하기 때
문에 DNA나 RNA를 오래 보관하고 싶으면 이런 상태로 두기도 합니다. Sodium acetate
용액의 pH는 5.2 짜리를 많이 써 왔는데, 최근에 나오는 책에는 이보다 높은 것을 사용하
라고 되어 있기도 합니다. Ethanol은 품질이 좋은 Merck 사 제품을 쓰는 것이 좋습니다.
이 에탄올은 absolute ethanol이라 하며, -20°C에 보관하도록 합니다.
※ Supercoiled(closed circular) DNA와 open circular DNA
분리한 DNA를 전기영동하면 분리가 아주 잘 되었을 경우 대부분 supercoiled form
DNA만 보이지만 분리과정에서 작은 충격을 입어서 open circular form이 조금 나타날
수도 있습니다. 보통 DNA는 supercoiled form으로 존재하지만, 한 쪽 strand에 nick이
생기면 supercoil이 풀어져서 open circular form이 됩니다. 실제로 같은 DNA가
supercoiled, linear, open circular form으로 존재할 수
있는데, 이들을 전기영동하면 같은 염기서열의 같은 크기
DNA라도 이동하는 거리가 제각기 다릅니다.
Size marker로 쓰는 짧은 DNA는 linear form입니다.
이렇게 전기영동으로 size를 비교할 수 있는 DNA는
linear form DNA 뿐입니다.

키워드

miniprep,   Alkali lysis method,   plasmid DNA 분리