기기분석실험 (HPLC)

목차

1. 실험제목

2. 실험 목표

3. 이 론
　< HPLC 장단점>
　<구성및 역할>

4. 실험기기
　1. 기기명과 종류
　2. 기기구성

5. 실험
　1. 실험 장치 및 시료, 분석조건
　2. 실험방법
　과제

6. 참고 자료

본문내용

다.
① UV Detector: UV(190～400㎚), 가시광선영역(400～800㎚)
물질의 흡광도 측정
A = εbc ↔ A ∝ c
(A : 흡광도 , ε : 흡광계수 , b : 빛이 통과하는 길이 , c : 농도)
② RI Detector: 용매와 시료의 굴절률의 차이를 이용 (waters 996)
③ Fluorescence Detector: 형광물질, 고리화합물 분석
UV에 비해 1000배 이상의 감소
④ Conductivity Detector: 이온크로마토그래피, 음이온, 양이온 측정
전기전도도의 차이 이용
5. 실험
1. 실험 장치 및 시료, 분석조건
(1) 분석시료 : Benzene, Toluene,
(2) 이동상 용매 : Methanol 80%, water 20%
(3) Flow rate : 1.0ml/min
(4) 컬럼 : C18
(5) Detector (Photodiode Array detector: waters 996)
(6) 분해능 0.8 이상으로 setting
(7) 검출파장 : 254nm
(8) 표준물의 농도 : 50ppm
2. 실험방법
이동상을 넣어준다. ( water, methanol )
시료는 이동상에 녹을수 있는 것이어야 한다.



시료를 공기가 들어가지 않도록 주의하면서 시료를 시린지에 채워 넣는다.

시린지를 이용하여 20㎕짜리 루프에 시료를 넣어준다. 이때 시료의 양을 20㎕보다 더 많이 넣어서 루프에 시료가 정확하게 20㎕가 채워질 수 있도록 한다.

분석 소프트웨어에서 setting up 상태에서 waiting이 화면에 나올 때까지 기다린다.

시료가 채워진 시린지를 밸브를 로드상태로 하고 시료 주입구에 넣고 시료를 주입 한다.

밸브를 다시 injector로 돌려주면 분석이 시작된다.

실험이 끝난 후에도 이동상을 컬럼으로 흘려줘서 컬럼이 세척이 될 수 있도록 한다.
★ HPLC에서는 매우 순도가 높은 용매를 사용 (HPLC grade)
* Filtering : microfilter를 깔고, 용매 filtering (불순물 걸러줌, 기포방울제거)
* Sonication : 초음파 진동으로 미세한 공기방울 제거
* Sparge : 공기보다 가벼운 기체(He)를 불어넣어 그 안의 공기방울을 빼냄
과제
1. sample injection 시에 오차 줄이는 방법
(1)이동상에 시료를 sample injection 할 때에는 마이크로시린지 끝에 꽂힌 관을 이동상에 닿도록 넣고 완전히 용해 시키면 오차가 줄어 든다.
(2)시료를 sample injection 한 뒤에는 이동상 sample vial에 주입하여 한번 씻어주고, 증류수에 3번 씻어주어 희석 시킨 후에 다른 시료를 sample injection 해준다.
6. 참고 자료
1) Supina, W.R., The packed column in gas chromatography, Supelco, Inc, 1974
2) Littlewood, Gas chromatography, 2nd ed.., Academic press, 1970

키워드

기기분석실험,   HPLC,   크로마토그래피