분자미생물학 실험- mini preparation(plasmid DNA를 소량 분리하는 방법)실험

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분자미생물학 실험- mini preparation(plasmid DNA를 소량 분리하는 방법)실험에 대한 보고서 자료입니다.

본문내용

5ml 멸균된 LB medium에서 overnight 한다(37℃에서 최소한 mid-log phase 까지 배양한다).
2. 1.5ml의 종배양액을 1.5ml microcentrifuge tube에 옮기고 원심분리하여 cells을 모은다 (pellet). 상등액을 제거한다.
3. 200㎍ lysozyme이 든 STET soln. 300㎕에 pellet을 녹인다.
4. 30s∼10min정도 얼음물에다 tube를 정치한다.
5. boiling water bath(100℃)에 1∼2 min 정도 tube를 정치한다.
6. 15∼30min정도 원심분리한다.
7. pipet으로 상등액을 새로운 tube에 옮긴다(이때 pellet에 주의하여 옮긴다). 200㎕(상등 액과 같은 양) cold isopropanol에 섞는다. -20℃에서 15∼30 min 정도 정치한다. 다시 5 min 정도 원심분리한다.
8. 상등액을 제거하고 pellet이 마를 때 까지 진공상태로 정치한다.
9. 50㎕ TE buffer에 pellet을 녹여 보관한다.
reference
분자미생물학실험실(MMlab)
http://ynucc.yu.ac.kr/~mmblab/5-5.html

키워드

유전자 재조합,   분자미생물학,   plasmid DNA 소량분리 ,   mini preparation