LAB 04 : 재조합DNA의 제조 (제한효소 및 ligase효소반응)

소개글

LAB 04 : 재조합DNA의 제조 (제한효소 및 ligase효소반응)에 대한 보고서 자료입니다.

목차

4R-1. Cloning vector로서 pBR322와 pUC18 DNA를 이용하였을 경우 재조합 DNA의 선별방법을 설명하라.

4R-2. Single Restriction Enzyme으로 절단된 vector의 경우 self-ligation 으로 인하여 외래 DNA가 삽입되는 효율이 매우 낮다. 이 경우 어떻게 하면 외래DNA를 쉽게 삽입시킬 수 있을 지 의견을 제시해 보라.

본문내용

nzyme으로 절단된 vector의 경우 self-ligation 으로 인하여 외래 DNA가 삽입되는 효율이 매우 낮다. 이 경우 어떻게 하면 외래DNA를 쉽게 삽입시킬 수 있을 지 의견을 제시해 보라.
: 양 말단이 동일한 제한효소 부위를 가지는 DNA경우 vector의 양말단도 역시 동일한 제한효소 부위를 가져야 할 것이다. 제한효소 처리로 linear한 형태인 vector는 본래의 원형인 형태를 가지려는 성향, 즉 self-ligation이 되려는 성향이 상당히 강하다.
닫혀있는 vector에 insert DNA 삽입은 아무소용 없다. 그래서 제한효소를 처리한 vector에 alkaline phosphatase로 5’-phosphate를 제거함으로써 self-ligation 을 방지할 수 있다.
그럼 DNA한쪽 방향은 둘다 - OH group이 되는데, 연결하는 방법은 다음과 같다. Dephosphorylated vector와 foreign DNA이 연결시 두 개의 nick을 갖는 open circular form이 형성되는데 이는 host로 transformation된 후 repair system에 의해 수선되어 완전한 원형을 이루게 된다.

키워드

재조합DNA의 제조,   제한효소 및 ligase효소반응,   cloning vector,   pBR322,   pUC18 DNA,   DNA의 선별방법,   Single Restriction,   self-ligation,   enzyme