목차
생물학 실험 예비보고서 - PCR을 이용한 유전자 증폭
1. 실험제목 : PCR을 이용한 유전자 증폭
2. 실험일자
3. 실험목적
4. 실험기구 및 시약
5. 실험이론
-PCR이란?
-PCR증폭효율에 영향을 미치는 요인
-중합효소 연쇄반응은 다수의 DNA 서열 사본을 만든다.
-PCR법의 이용
-PCR 실험시 주의사항
6. 실험방법
7. 참고문헌
1. 실험제목 : PCR을 이용한 유전자 증폭
2. 실험일자
3. 실험목적
4. 실험기구 및 시약
5. 실험이론
-PCR이란?
-PCR증폭효율에 영향을 미치는 요인
-중합효소 연쇄반응은 다수의 DNA 서열 사본을 만든다.
-PCR법의 이용
-PCR 실험시 주의사항
6. 실험방법
7. 참고문헌
본문내용
Mg2+ 농도는 PCR을 실행할 때 다음의 사항에 관여하고 있는 것으로 여겨진다. ① 효소활성, ② primer의 annealing, ③ 합성된 DNA의 충실성, ④ primer-dimer의 형성 등이 있다. 킬레이트제(예를 들면 EDTA)는 반응액 속의 Mg2+ 농도에 영향을 미치므로 주형으로 사용하는 DNA 용액에서 turn over하는 것에 주의할 필요가 있다. 또한 유효한 Mg2+ 농도는 dNTP 농도와도 관계하므로 어느 실험에서나 최적 Mg2+ 농도를 결정하려고 할 경우 항상 dNTP 농도를 고려해야 한다. 일반적으로 Mg2+ 농도가 높아지면 DNA 합성의 충실성에 영향을 미칠뿐만 아니라 두가닥 DNA 변성이 어려워지고, Taq Polymerase는 10 mM MgCl2에 의해 40~50%의 저해를 받으므로 MgCl2를 과잉되게 첨가하는 것은 바람직하지 않다.>
DNA template
-PCR증폭은 일련의 단계가 주기적으로 반복되는 반응이다
첫 단계는 DNA주형의 두 가닥을 단일가닥으로 분리하도록 거의 끓는점 가까운 온도로 반응물을 가열하는 것이다.<첫열변성 과정은 1-9분간 94-97℃ 사이의 열을 가하여 두 가닥의 DNA (dsDNA) 사슬을 한 가닥(ssDNA)으로 분리한다. 이 때 DNA 두 가닥 사슬 사이의 상보적인 염기대를 유지시키고 있는 수소결합이 제거된다. >
다음 단계는 반응물의 온도를 낮춰서 프라이머가 주형가닥에 결합하게 만든다. <시발체의 결합과정은 55~65℃로 온도를 낮추어ssDNA 주형에 시발체가 상보적 염기순서에 결합하는 과정인데 적정온도는 주형 DNA와 시발체의 염기배열에 따라 달라진다.>
그 다음 단계로 DNA 중합효소가 새로운 상보가닥의 합성을 촉매할 수 있도록 최적의 온도로 반응물의 온도를 올려준다.<중합반응은 약간 열을 올려서 DNA 중합효소와 3\'dNTP를 이용하여DNA를 합성하는 과정이다. 시발체가 붙은 직후의 주형 DNA로부터 5\'에서 3\' 방향으로 주형 DNA의 염기순서에 상보적인 새로운 염기순서를 합성하여 DNA 사슬을 연장시킨다.>
한 주기가 진행되어 표적 DNA 서령
DNA template
-PCR증폭은 일련의 단계가 주기적으로 반복되는 반응이다
첫 단계는 DNA주형의 두 가닥을 단일가닥으로 분리하도록 거의 끓는점 가까운 온도로 반응물을 가열하는 것이다.<첫열변성 과정은 1-9분간 94-97℃ 사이의 열을 가하여 두 가닥의 DNA (dsDNA) 사슬을 한 가닥(ssDNA)으로 분리한다. 이 때 DNA 두 가닥 사슬 사이의 상보적인 염기대를 유지시키고 있는 수소결합이 제거된다. >
다음 단계는 반응물의 온도를 낮춰서 프라이머가 주형가닥에 결합하게 만든다. <시발체의 결합과정은 55~65℃로 온도를 낮추어ssDNA 주형에 시발체가 상보적 염기순서에 결합하는 과정인데 적정온도는 주형 DNA와 시발체의 염기배열에 따라 달라진다.>
그 다음 단계로 DNA 중합효소가 새로운 상보가닥의 합성을 촉매할 수 있도록 최적의 온도로 반응물의 온도를 올려준다.<중합반응은 약간 열을 올려서 DNA 중합효소와 3\'dNTP를 이용하여DNA를 합성하는 과정이다. 시발체가 붙은 직후의 주형 DNA로부터 5\'에서 3\' 방향으로 주형 DNA의 염기순서에 상보적인 새로운 염기순서를 합성하여 DNA 사슬을 연장시킨다.>
한 주기가 진행되어 표적 DNA 서령
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