[미생물공학 실험] 균주탐색 실험 : Bacillus coagulans를 찾아내기

소개글

[미생물공학 실험] 균주탐색 실험 : Bacillus coagulans를 찾아내기에 대한 보고서 자료입니다.

목차

<서 론>
1.Bacillus coagulans의 특징 및 설명
2.실험전략

<본론 및 결론>
1.실험목적
2.실험방법
3.실험결과
-blast 결과 분석
-분자량 결정
4.실험고찰
-1차실험실패이유

본문내용

집적배양을 하고 산생성시 균주 선발 및 순수분리 과정을 통해 균주를 선발한후 16s rRNA 유전자 증폭 시키고 염기서열 분석을 하는 것으로 전략을 세웠다.
본론 및 결론
1.실험목적:Bacillus coagulans의 분리
2.실험방법(2차 실험 기준)
2014.5.26.(월)
집적배양 과정
-총 4가지 시료 중 {순창 메주,생기몰 메주,재래식 메주(초기,후기),쌀겨} 재래식 메주를 선택하여서 초기,후기 재래식 메주를 각각 10g을 채취후 MRS broth와 항진균제인(Cyclohexmide,NaN3)을 넣어서 농도를 10ppm으로 맞춰주고 autoclave에 50도로 배양한다.
-집적배양 과정시 주의사함
autoclave에 넣은뒤 shaking과정을 하지 않는다. shaking 과정시 균이 유리에 닿아 죽을 수 있기 때문에 방지하고자 하지 않는다. 50도로 유지시켜준다.
2014.5.29.(목)
spreading 과정
-autoclave에 배양했던 것을 꺼내어서 10-1부터 10-9까지 희석시킨뒤 희석시킨 것을 100ul씩 따서 MRS Agar배지에 speaing을 한다.(배지의 농도는 10-2부터 10-10이 된다)
speading한 배지를 초기와 후기로 나누어 각각 랩으로 씌워준뒤 다시 autoclave에 넣어준다
-speading 과정시 주의 사항
제대로 희석이 안되 었을시 균이 제대로 안자랄수 있으므로 희석시 주의해서 해야된다.
MRS Agar배지에 Spreading과정시 균의 오염이 발생할수 있으므로 반드시 Clean bench 안에서 해야한다.
수분의 증발로 인한 배지에 손실을 막기 위해서 랩을 반드시 씌워준다.
2014.6.2.(월)
균주 선발 및 순수분리 후 유전자 증폭
-speading 과정 후 autoclave에 넣었던 배지들을 꺼낸뒤 투명환을 생성한 30~300개의 single colony가 형성 된 것을 고른다.
-이쑤시개를 이용하여 균을 채취 후 PCR을 한뒤 PCR의 산물을 전기영동법을 통해 DNA의 단편을 확인하고 UV를 이용하여 DNA의 존재를 확인한 후 염기서열을 의뢰하는 기관에 맡긴다.
-검사결과가 나오면 결과가 나온 염기서열을 이용하여 16S RNA sequence의 상동성을 분석한다.
-주의 사항
Colony PCR 에 template 1ul, primer-Forward and Reserve 각각 1ul, dNTP1ul.
10x Reaction buffer 5ul, Taq polymerase 1ul씩 만들어준다.
전기영동한 시료 2ul와 염색시약(loading star) 1ul을 같이 섞은 후 gel에 닿지 않게 조심히 넣어준다.
-이쑤시개로 균을 채취 하는 과정에서 오염이 발생할수 있기에 주변을 소독 해준뒤 clean bench에서 작업을 시행한다.
실험결과
초기 재래식 메주에서 10-2,10-3 빼고는 그이상의 희석 농도에서는 colony를 형성된게 수가 많지않거나 아예 형성이 안되었고, 후기 재래식 메주에서는 colony가 너무 많이 형성되거나, 진물이 만들어
지는 형태로 되었있었기

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