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1. 실험제목 : Plasmid DNA preparation
2. 실험목적 : Ampicillin에 대하여 저항성을 지닌 E. coli (XLI-Blue, Amp-r) 의 plasmid DNA【pBluescript SKⅡ(+)】를 isolation 한다.
3. 실험원리
1. Plasmid 란?
-플라스미드는 박테리아의 세포안에 존재하는 박테리아 크로모좀 이외
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플라스미드의 기본적인 특징만을 열거 해 보면
* 세포세포내에서 염색체와는 독립적으로 존재하는 환상의 DNA
* 세균의 항생제에대한 저항성은 세균이 갖고 있는 플라스미드에 기인된다.
(선발표지로 이용된다.)
* 모든 플라스미드는 복제 개
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대하여 bactericidal 활성을 갖는 물 질을 말한다. 젖산균(lactic acid bacteria)은 부패성 미생물의 생육을 억제하여 동서양을 막론하고 식품 의 유용한 보존 수단으로 응용되어 왔으며, 특히 유제품, 육제품, 침채류 및 각종 젓갈류의 가공에 이 용되
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플라스미드의 1군. 같은 불화합군에 속하는 플라스미드는 하나의 세포내에 안정하게는 공존할 수 없고, 세균의 증식에 따라 어느 쪽인가의 플라스미드가 탈락하고 만다.
pili
plasmid : 숙주염색체란 물리적으로 독립하여 자율복제하는 능력을
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ion으로 SDS에 의해 cell membrane 단백질의 고유 전하가 변하 고 lipid가 제거되어 cell이 깨지게 되며 NaOH로 인하여 PH가 급격히 상승함에 따라 bacteria의 chromosomal DNA는 변성되어 분리 되고 supercoiled plasmid는 일부만 영 향을 받는 형태로 존재하게 된다.
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Plasmid DNA 분리 (이온 교환 크로마토 그래피)
형질전환 된 E.Coli cell로부터 plasmid DNA를 재분리 하고자 하는 실험으로서, plasmid preparation method에는 alkali lysis법, boiling법, 효소 분해법 등이 있다.
형질 전환 균주가 갖고 있는 플라스미드에 존재
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plasmid 전기영동
가. 아가로즈를 열에 녹여 트리이에 부어 굳힌 모습
나. 로딩염료와 섞은 플라스미드를 홈에 넣은 모습
다. 전기영동하며 분리되는 모습이다. 하단부 쪽이 음극이고 상당부가 양극이다. 로딩염료의 성분인 Bromophenol blue는 보
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60 mL (MW=98.14, 29.44 g)
Glacial acetic acid 11.5 mL
DW 28.5 mL
⑤ TE buffer (100 mL)
10 mM Tris-HCl (pH 8.0) (MW=121.1, 0.3 g)
1 mM EDTA (pH 8.0) (MW=372.2, 0.04 g)
⑥ Ethanol, 70% Ethanol, Phenol/Chloroform/Isoamyl alcohol (각각 100 mL)
⑦ Spectrophotometer, 1.5 mL Eppendorf Tube, Microcentrifu
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대하여 저항성을 지닌 E.coli의 plasmid의 DNA를 isolation하는 것이였다. chromosomal DNA와 plasmid DNA는 서로의 크기와 구조의 차이 때문에 분리가 가능했다. chromosomal DNA가 plasmid DNA보다 훨씬 크고, 형태도 chromosomal DNA는 linear DNA인 반면에 plasmid DNA는 closed
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Plasmid DNA (Hemoglobin)를 직접 transformation 해보았고, 결과로써 LB Plate에 형성된 colony를 확인하였다. 1. 주제
2. 실험목적
3. 실험원리(서론)
■ Transformation (형질전환)
■ Competent cell (수용세포)
■ Vector (벡터)
■ 플라스미드 (Plasmid)
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