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(2) HPV의 DNA 검출
(3) HPV의 RNA 검출
(4 )PCR-SSCP 법을 이용한 유전자 다형성 검출 PCR(polymerase chain reaction, 중합효소 연쇄 반응)
1. PCR이란:
2. PCR의 단계
3. PCR의 구성요소
4. Studying PCR products
5. PCR의 종류
6. PCR의 용도
7. 사용증례
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실험 목적
2. 실험 이론
▣ PCR(Polymerase Chain Reaction, 중합효소 연쇄반응)의 원리
▣ PCR Cycle
➀ DNA의 변성 (Denaturation)
② Primer의 결합 (Annealing)
➂ DNA의 합성 (Extension)
3. 실험 방법
* 실험 기구 및 시약
4. 실험 시 주의사항
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효소 올리고탐침이다. 다른 방법으로는 한 쌍의 HybProbes와 LightCycler를 사용한 방법들이 특히 미생물의 검출과 유전자형 분석에서 중요해지고 있다. 또한 바이러스-검출용 실시간 PCR가 다른 미생물 분야보다 더 많이 문헌에서 찾아볼 수 있다.
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PCR의 원리 및 순서
중합효소 연쇄 반응(Polymerase chain reaction)
PCR법에 의해 세포·조직에서 아주 미량의 DNA를 추출해 특정영역 DNA를 증폭해 유전자 진단 등에 이용하는 것이 가능하다.
주형이 되는 double strand DNA의 표적 부분의 양끝 염기
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중합하는 과정에 필요한 효소로, PCR의 과정에서 가열과 냉각이 반복되기 때문에 90°C 이상의 고온에서도 활성을 잃지 않는 효소를 사용한다. DNA의 5’에서 3’ 으로 합성하고, 3’에서 5’ 으로 잘못된 염기를 교정하는 능력을 가지고 있다.
Fig
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필요하며 사용하는 기구에 따라 반응시키는 방법들이 다양하게 제시되어 있다.
ISPCR은 세포내의 target sequence를 증폭시키는 것으로부터 반응이 시작되며 세포막을 통해 여러 물질(예: PCR 용액에 들어 있는 salt 등)들이 쉽게 이동할 수 있도록
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다.
PCR의 응용
1. PCR을 이용한 적은양의 DNA 연구
2. PCR의 임상 진단에의 응용
3. PCR의 RNA 증폭에의 응용
4. 상이한 유전체들의 비교를 위한 PCR +중합효소 연쇄반응(Polymerase Chain reaction)
+PCR 산물의 연구
+PCR의 응용
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중합효소는 프라이머에서 출발하여 나머지 조각의 DNA를 복제해 나간다.
5. Repeating : 위의 과정을 계속 반복수행되어 새로 합성된 조각이 주형으로 각 주기마다 두 배의 DNA 양을 형성하게 된다.
PCR의 응용분야
이 PCR 방법은 기존의 클로닝 작업
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PCR의 반응조건
1) template DNA
2) PCR primer
3) Mg²+
4) Deoxynucleotide triphosphate (dNTP)
5) Enzyme
6) Reaction temperature PCR & 제한효소처리
PCR
PCR의 원리
PCR의 반응조건
PCR의 과정
PCR 반응시의 문제점
PCR 반응시의 문제점
제한효소(Restriction Enzyme)
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다.
증폭될 DNA단편은 길이상 약 3kb보다 더 크지 않아야 하며 이상적인 길이는 1kb미만이다. 10kb이상의 단편들이 표준 PCR기술들에 의해 증폭될 수는 있지만 더 긴 단편일수록 증폭 효율은 더 낮고, 안정적인 결과를 얻기가 어려워진다.
그러면
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