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예를 들면 염색을 하기 전에 20% sulphosalicylic acid에 의해 변성시켜 고정한 후 염색을 하거나 염색과 관련된 변성 용매에 의해 고정하여야 한다. 후자의 경우 대표적인 용액으로는 10%(V/V) acetic acid가 있는 0.25% Coomassie blue를 메탄올 수용액(1:1, V/V)
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다고 생각할 수 있다.또한 MAFbx값
틴의 발현 감소를 초래한다. Western Blotting을 한 Akt-1의 Band 이미지를 보면 Control군의 Band가 Hu군보다 조금 두껍다는 것을 확인할 수 있고 수치상으로도 control군이 HU군보다 높은 값이 나왔다. 이는 Control군이 HU군
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수는 없기에 미소중력 상태에서의 근육의 변화를 관찰할 수 있고, 그 결과를 바탕으로 무중력 상태에서의 변화도 예측할 수 있을 것이다.
이번 실험에는 미소중력 상태에서의 단백질 양의 차이를 확인하기 위해서 western blot을 수행하였다. west
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SDS-PAGE를 사용한다. Native-PAGE는 SDS를 사용하지 않기 때문에 denaturing을 일으키지 않아 folding도 분리에 영향을 미친다는 점에서 오로지 크기로 분리하는 SDS-PAGE와는 차이가 있다. 따라서 Native-PAGE는 단백질 간의 binding을 분석하는 등 단백질 구조
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ody의 밑 부분은 enzyme부분이기 때문에 온도변화에 민감하다. 직접적으로 잡지 않도록 조심해야 한다. 2㎕ 딸 때는 푹 담그면 tip에 많이 묻기 때문에 살짝만 담가서 따도록 한다. 그다음 파이펫팅을 해준다. 실험 결과 우리 조는 단백질 band가 검
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antibody 붙이기
6)secondary antibody 붙이기
7)ECL solution
8)blotting
III. Results
-검출된 band가 size marker와 비교해서 분석하고자하는 단백질의 크기와 일치하는가?
IV. Discussion
-다른 위치에도 band가 검출된 이유
-그 외 문제 원인 분석
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Western blotting 으로 양을 보았더니 A 시료와 B 시료 다음으로 두께가 보여야 했는데 우리가 실험한 C 값의 두께는 다른 조의 미지시료의 것보다 상대적으로 두꺼웠다.
3. 오차 값에 대한 고찰: 오차 값이 나타난 가장 큰 원인은 피펫팅에 있었다
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월드사이언스/pp.1~40
7. 세포 배양 노트/ 월드사이언스/pp.1~69
6. http://google.com
7. http://apollo.mokpo.ac.kr/%7Esjkim/cgi-bin/technote/read.cgi?board=lab_bbs&y_
number=13&nnew=2 1.cell culture
2.virus infection
3.protein extract
4.Bradford method
5.western blotting
< References >
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Western blot 원리
세포 또는 조직의 추출물을 전기 영동하여 그 속에 들어 있는 단백들을 크기 별로 구분
흡착지에 옮겨 놓고 조사하고자 하는 단백의 항체와 결합
단백의 존재 유무와 크기 등을 밝히는 검사, 면역 블롯팅이라고도 불림
3)Western
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Blotting
5) Phage typing
6) Fatty acid profiles
7) Flow cytometry (유세포 분석기)
8) DNA base composition
9) DNA fingerprinting
10) The polymerase chain reaction (PCR)
11) Nucleic acid hybridization
-Southern blotting
-DNA Chips
-Ribotyping and Ribosomal
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