세포생물학- Elution of DNA

목차

1.Introduction

2. Material

3. Method

4. Result

5. Discussion

본문내용

분간 말리는데, 상층액을 버릴 때에 100% EtOH이 있기 때문에 엎고 나서 다시 바로 하면 안된다. 남은 pellet이 다치지 않으려면 그대로 엎어둔 상태에서 한참을 놔둔 뒤에 65도씨에서 5분간 더 말린다. D.W 15ul을 넣고 다시 65도씨에서 10분을 열처리한다. 그런 뒤에 -20도씨에서 보관 한다. 우리가 회수한 부분은 저번 실험으로 특정 부위가 증폭된 것으로 positive control부분이다. 이런 특정 부위를 회수 하는 이유는 probe를 만들기 위해서이다.
*추가적 내용: 그리하여 그 다음에 바로 Synthesis of DNA probe 실험을 진행하였다. 우선 추출한 DNA인 templats DNA와 random primer를 98도의 온도에서 10분동안 heating을 하였다. 그 후 바로 10분간 ice에 방치하였다. 여기서 사용한 random primer는 효소반응을 이용한 표지법이다. 즉, DNA의 생합성은 단일가닥의 template에 결합된 primer로부터 DNA polymerase에 의해 시작된다. 만일 primer가 동일한 것이 아니고 여러 종류가 섞여있을 경우 이들은 template의 여러 부위에서 hybrid를 형성하게 되고, 결과적으로 template의 모든 nucleotide가 동일한 빈도로 합성되어 복제되게 된다. 이 방법에 의하여 [α-32P]dNTP를 전구물질(precursor)로 사용하여 DNA에 매우 높은 specific activity로 동위원소를 표지할 수 있다. 이러한 처리를 시킨 것에 dig-11-dUTP, klenow enzyme, klenow enzyme 10Xbuffer의 혼합액을 처리하였다. 여기서 사용한 klenow enzyme은 end-filling(filling-in)을 위함이었다. Filling-in이란 Klenow 효소를 이용하여 3'-쪽 끝에 방사능을 지닌 DNA를 만들어 주는 방법이다. 즉, DNA염기에 들어가서 나중에 southern 후 형광물질이 나타나게 하는 것이다. 이러한 처리를 한 후 37도에서 incubation을 시켰다. 그 후 나중 southern시에 사용하기 위하여 -20도에서 보관하였다.
*Reference
유전자클로닝입문 제 4판/강종백 외3인/월드사이언스/2003
유전 공학 기본과 실제/권무식/아카데미서적/2004
유전자 공학의 원리/심웅섭/고려대학교 출판부/1999
유전자의 분자 생물학/고상균/탐구당

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