바이오에탄올실험

목차

1. INTRODUCTION ---------------------------------- 1

1-1. 멸균법 --------------------------------------------------- 1

1-1-1. 화염멸균법 --------------------------------------------- 1

1-1-2. 건열멸균법 --------------------------------------------- 1

1-1-3. Autoclave법 -------------------------------------------- 1

1-1-4. Membrane filter에 의한 멸균법 ---------------------------- 2

1-2. 배지[培地, culture medium] 의 제조 --------------------------- 2

1-3. 미생물의 증식 --------------------------------------------- 3

1-3-1. 세포분열 ----------------------------------------------- 3

1-3-2. 집단생장 ----------------------------------------------- 3

1-3-3. 미생물 생장 곡선 ---------------------------------------- 4

1-4. 효모 ----------------------------------------------------- 5

2. EXPERIMENT ------------------------------------------- 6

2-1. 실험방법 ------------------------------------------------- 6

2-2. 시약 및 실험기구 ------------------------------------------ 6

2-2-1. 시약 --------------------------------------------------- 6

2-2-2. 실험기구 ----------------------------------------------- 7

3. RESULT & DISCUSSION -------------------------------- 8

3-1. RESULT ------------------------------------------------- 8

3-2. DISCUSSION --------------------------------------------- 9

REFERENCE ----------------------------------------------- 10

본문내용

ENT
2-1. 실험방법
실험은 첫째날 배지만들기, 둘째날 Steaking, 셋째날 UV측정 및 당분석으로 이루어 진다.
1일차에는 먼저 각각 Yeast Extract 1g, Dextrose 2g, Peptone 2g 무게를 측정하여 500ml플라스크에 넣고 증류수 100ml를 넣어 용해시킨다. 이와 동일한 비율으로 200ml, 300ml짜리 액체배지를 만든다. 또한 액체배지의 성분과 동일하게 첨가한 후 Agar만 1.5% 더 첨가하여 핫플레이트에서 가열, 교반하여 고체배지를 제조한다.
고체배지의 양은 petri dish에 약 25~30ml씩 사용할 것이므로 총 열개의 고체배지를 만들기위해 300ml를 제조한다. YPD액체배지는 면전, 호일로 덮어주고, 고체배지는 호일만 덮어 121℃에서 15분간 Autoclave에 90분 동안 멸균시켜준다. 멸균 후 80℃까지 떨어질 때까지 기다린 후 clean bench에 넣어둔다.(Clean bench에서 작업할 때는 70% 알코올로 손을 소독하는 등의 정확한 사용법을 익힌 후 사용해야 한다.) 고체배지를 약 60℃까지 식힌 후 petri dish 10개에 25ml~30ml씩 부어 뚜껑에 습기가 생기지 않도록 잠깐 열어둔다. 랩으로 감싸 하루동안 건조시킨다. 액체배지가 식으면 백금이를 화염멸균 시켜준 후 Yeast를 약간 묻혀 액체배지(100ml)에 넣어준다. 이때 삼각플라스크의 입구, 면전, 호일 등을 모두 화염멸균 해야한다. Shaking incubator에서 30℃ 24시간동안 배양시키고, 나머지 200ml 삼각플라스크는 clean bench에 보관한다.
2일차는 Steaking작업이다. 24시간정도 키운 액체배지에서 화염멸균된 백금이를 식힌 후 균을 묻혀 고체배지에 streaking 해준다. 이때 알루미늄 호일로 감싸진 플라스크도 열기전 반듯이 화염멸군 시킨 후 사용한다. 역시 모든 작업은 Clean bench에서 이루어진다. 플레이트를 뒤집어서 incubator에 넣고 30℃에서 하루이상 배양한다.
마지막 3일차에는 UV측정 및 당을 측정하게 된다. 화염 멸균한 백금이로 고체배지에서 미리 배양된 균을 묻혀 식혀둔 액체배지에 균이 묻어있는 백금이를 담가 균이 풀어지도록 한다. sampling하여 초기값측정을 위해 UV 및 당 분석을 한다. 이와 같이 준비된 배양액을 shaking incubator에서 30℃ 배양시킨다. 이후로 1시간마다 sampling하여 UV 및 당 분석을 시행한다. 시작 후 7시간동안 같은 위의 방법을 반복하여 시간변화에 따른 당의 농도와 UV측정 데이터를 작성한다.
2-2. 시약 및 실험기구
2-2-1. 시약
Yest Exract, Dextrose, Peptone, Ager
2-2-2. 실험기구
삼각플라스크 500ml 3개, 100ml 1개, 200ml 1개, 백금이, 플레이트, Yeast Extract, Dextrose, Peptone, 고압멸균기, 원심분리기, 당측정기, UV측정기
Fig.5. 고압멸균기 Fig.6. UV측정기
Fig.7. 원심분리기 Fig.8. 당 측정기
Fig.9. Shaking incubator Fig.10. Clean bench
3. RESULT & DISCUSSION
시간 (hour)
UV측정 (660nm)
당농도(g/L)
0
0.106
0.200
1
0.129
0.201
2
0.151
0.187
3
0.230
0.174
4
0.418
0.161
5
0.637
0.158
6
0.987
0.138
3-1. RESULT
Table.1. 시간에 따른 UV측정값과 당농도
Fig.11. 시간에 따른 UV측정값
Fig.12. 시간에 따른 당 농도 측정값
3-2. DISCUSSION
이 실험은 시간에 따른 UV값과 당농도를 측정함으로써 균의 증식과 이들의 관계를 알 수 있는 실험 이었다. 약 3일에 걸친 실험으로써 데이터 수집은 약 8시간에 걸쳐 이루어졌다. 미생물의 성장곡선과 위의 그래프를 대조하여 보았을 때 측정된 데이터 값은 미생물의 유도기와 대수기의 과정으로 판단된다. 유도기는 분열이 시작되기 전으로 시간과 세포수와의 그래프는 평행을 유지한다. 위의 UV값 측정 그래프에서 처음 시작부분이 이에 해당한다. 대수기(exponential phase)는 대부분의 세포가 성숙한 크기에 이르고 분열을 개시하게 될 시점으로부터 시작되고 개체군의 폭발적인 증식이 시작되어진다. 대수기를 거쳐서 정상성장기에 도달 하였을 때 더 이상 증가하지 않는 평행선을 다시 유지하게 되지만 데이터수집시간인 8시간 내에서는 정상성장기에 도달하지 못하였다.
위의 두 그래프를 통하여 미루어 보았을 때 처음 1~2시간을 세포성장 과정 중 유도기로, 다음 2~7시간을 대수기로 판단되어 진다.
세포수와 UV값의 관계는 비례관계이며 세포수와 당 농도 값과의 관계는 반비례관계에 있다. UV값은 빛의 투과정도를 통하여 농도를 측정하는 지표가 되므로 값이 증가 할수록 세포가 증가한다고 생각 할 수 있다.
당 농도 측정 결과 처음 값보다 두 번째 값에서 값이 조금 증가한 것을 볼 수 있는데 전체적인 실험내용상 세포가 당을 이용하여 성장하기 때문에 값이 증가 할 수는 없다. 이는 실험과정에서 당 농도 측정을 위한 Sample취급 과정에서 실험기구 등을 제대로 살균하지 못한 채 사용하였거나 이물질이 접촉되어진 것으로 생각된다.
Fig.13. UV측정값과 당 농도 값의 추세선 비교
REFERENCE
(1) 최신 식품 미생물학/ 문운당/ 유태종외 7명/ p.279,286,299,305
(2) 최신발효공학, 유림문화사 1997 김영만, 임무현 공저 94~115page
(3) 미생물과학, 도서출판효일 2000 민봉희 외 6인 167~169page
(4) 한국미생물협회, 1998, 미생물학 실험서, 을유문화사, 119～123page
(5) http://web.hanyang.ac.kr/%7Ebiopro/Course%20Materials/analyze/7-microvial.hwp
(6) http://www.encyber.com/member/login.php
(7) http://www.korins.com/list/15.html

키워드

바이오,   에탄올,   신재생에너지실험