HPLC(Tetracycline, Chloramphenocol) 분석

소개글

HPLC(Tetracycline, Chloramphenocol) 분석에 대한 보고서 자료입니다.

목차

1. 실험 목적
2. 실험 내용
3. 실험 관련 이론
4. 실험 장치
5. 실험 방법
6. 실험 결과
7. 고찰
8. 결론
9. Reference

본문내용

k Retention time을 통하여 가능하다.
- 많은 량의 시료를 고 순도의 단일 물질의 분리에도 많이 사용되며, 각각 활용 방법에 따라 이 름이 다르다.
- 분석용 : Analytical HPLC
- 분취용 : Preparative HPLC 라고 구분 한다 .
1) 이번 실험을 통해 Chloramphenicol 과 Tetracycline의 극성 여부를 알아보고 각각의 Retention Time, Area, Area %를 알아보고 비교해 본다.
2) 각 시료의 결과 그래프를 통해 지금까지 구조식으로만 예측했던 시료의 특성( 극성-비극성 유무)과 농도, Chloramphenicol 피크가 Tetracycline 피크보다 낮게 나온 이유, 총 Area %가 100%가 안되는 이유 등을 알아 본다.
2. 실험 내용
1) Method file 작성
- Pump module 즉 아래 그림에서 표시된 아이콘을 클릭.
① Pump 설정
- Instrument Setup이라는 창에서 Pump를 선택
- Mode에서 Binary Gradient 항목을 선택
- T.Flow에서 분석할 유량을 입력
- B.Conc에서 B용매의 비율을 결정
(ex, B.Conc에서 100을 입력하면 B용매만, 0을 입력하면 A 용매만 사용할 수 있게
되고, 50을 입력하면 A용매와 B용매를 50:50으로 사용할 수 있게 된다.)
② 초기에 pump 설정에서 B용매만을 흘려 보내게 setting하였다면, Time: 20min,
Module:pump, Event: B.conc, Value: 0으로 입력했을 경우 B용매의 농도가
20분 동안 100%에서 0%으로 차츰 감소한다는 것을 의미
2) Gradient 방법 setting
- Gradient 방법은 두 가지 이상의 용매를 사용하여 일정 시간 동안 어느 하나의
용매 비율을 일정하게 변화시켜 분석하는 방법 중의 하나.
- Time program은 HPLC 분석에서 gradient 방법을 사용하기 위한 것.
(Isocratic 방법을 사용할 경우는 setting할 필요가 없다.)
- Time: 만약 20을 입력했다면 20분 동안 gradient를 수행.
- Module: pump 항목을 선택
- Event: B.conc를 선택
- Value: Event에서 B.Conc를 선택하였기 때문에 이 값의 변화는 최종 B 용매의
농도 값을 나타냄
3) Purge 실시
- LC 기계를 이용한 purge 방법: purge valve를 한 바퀴 돌린 후 pump 에 있는 power 스위치를 누르고 purge button을 누른다.)
- 용매가 담겨져 있는 bottle에서 pump까지 연결된 line이 사용할 용매가 아닌 다른
용매로 채워져 있을 경우 사용 할 용매로 치환하기 위한 과정)
4) Column equilibrium (column 안정화)
- 분석에 사용하고자 하는 용매를 column안에 통과시킴으로써 기존에 충진 된 용매를
밀어내고 사용할 전개 용매를 충진 하는 과정.
- Purge 과정이 끝난 뒤 A 또는 B 용매를 적절한 유량(2~3ml/min)으로 setting 한 뒤 download를 누르면 설정된 용매는 column을 통과.
(유량을 6ml/min을 넘으면 안 됨. 압력이 250bar를 넘어서도 안 된다. 만약, 이
과정에서 pump가 작동하지 않는다면 system on 아이콘을 클릭.)
[사진 1]. Method file 작성법.
[사진 2]. 모든 값 설정 후 Download.
[사진 3]. Purging.
[사진 4]. Column equilibrium.
[사진 5]. Injector washing. [사진 6]. sample infection
3. 실험 관련 이론
★ 역상 크로마토 그래피 :
- 고정상(비극성) : C-18, C-8, C4, Phenyl
- 이동상(극성) : 물 및 물과 섞이는 이동상 병형제
- 적용 시료 : 중성, 약산 및 염기성 용질 등
- 장점 : 이동상의 완충염(Buffer salts), 이온쌍 시약과 같은 다양한 첨가제를 적절히 추가함으로써 비이온성, 이온성, 또는 이온화 가능한 시료를 분리 할 수 있다.
분리 하고자 하는 시료 분자의 소수성 정도에 따라 용리 순서의 예측이 용이하다.
2) ★ HPLC의 기본원리
* Partition(분배) Chromatograph :
① 고정상으로 사용되는 고체 지지체의 표면 액상과 이동상으로 사용되는 액체에 대한 분배 력의 차이에 의해서 분리가 이루어 진다. 정상법은 정지상이 극성이고 이동상은 비극성 용 매이며, 반대로 역상법은 정지상은 비극성이고 이동상은 극성이다.
② 가장 일반적인 chromatography type
③ 고정상으로 사용되는 고체 지지체의 표면 액상과 이동상으로 사용되는 액체에 대한 분배력 의 차이가 분리를 좌우.
④ 고정상은 다공성 지지체에 화학적으로 결합되어 있음.
⑤ Normal phase
고정상은 이동상보다 more polar, 비극성 화합물이 먼저 용출된다.
⑥ Reverse phase
비극성 고정상과 극성 이동상 사이의 분배정도 차이 이용, 극성화합물이 먼저 용출된다.
* Reverse phase(역상)에서 이동상으로 사용되는 용매들
: Water, Methanol, Acetonitrile, Isopropanol, Dioxane, Tetrahydrofuran, Mixed Solvents (from above)
3) ★ 시약 조사.
Chloramphenicol
* 식: C11H12Cl2N2O5
* 분자량: 323.13
* IUPAC International Chemical Identifer:
InChI=1/C11H12Cl2N2O5/c12-10(13)11(18)14-8(5-16)9(17)6-1-3-7(4-2-6)15(19)20/h1-4,8-10,16-17H,5H2,(H,14,18)/t8-,9-/m1/s1
* CAS Registry Number: 56-75-7
* 화학 구조:
* 설명(해설)
- 생화학/생리적인 반응
반응 방법 :펩타이드 전이효소 단계일때 리보좀의 50S subunit에서 전이를 막아준다.(연장 방해). 세균

키워드

화학분석,   기기분석,   분석화학,   HPLC,   크로마토그래피,   Tetracycline, Chloramphenocol