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. 이는 과잉의 시약을 제거하여 다음 시약의 작용을 정확히 하도록 도와주기 위함이다. 또한 정확한 그람염색을 위해서는 배양시간이 24시간이 넘지 않은 신선한 균주를 사용하여야 한다. 특히 그람 양성균은 배양시간이 경과함에 따라 1차 염색약의 착생능이 줄어들어 그람 음성균이 되기도 한다. 이것을 유의해서 실험을 하면 올바른 결과를 얻을 수 있을 것이다.
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