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실험에서 사용한 IPTG (1000X)는 젖당과 그 구조가 유사한 물질이기 때문에 젖당과 같은 매커니즘을 따라 억제 단백질과 결합한다. 따라서 downstream이 정상적으로 유전자를 발현할 수 있게 한다. 하지만 IPTG와 젖당의 다른 점은 젖당은 lacZ에서 발
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실험의 샘플링 횟수를 증가시키거나 측정범위를 세분화하여 정확한 값을 나타낼 수 있다는 것을 실 험을 통해 증명해 주었다. 이번 실험에서는 오차가 다른 기계공학실험에 비해 적었다 고 할 수 있는데 만일 현장에서 로드셀과 같은 전자장
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(Plasmid) 는 생장에 필수적인 염색체 (Chromosom) DNA에서 물리적으로 분리되어 있는 대표적인 에피솜 DNA 분자이다.
⑤ Nuclease free water
⑥ Forward primer, Reverse primer
Fig 12 . Nuclease free water
- 핵산 실험을 할 때, 문제되는 핵산을 포함하고 있지 않은 초순
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실험에 있어서 cell의 검출 목적 등에 이용되며, 특정 파장의 UV를 조사하여 형광을 일으키므로 투명성과 UV intensity가 탁월하기 때문에 electrophoresis 실험 시 미량의 DNA도 검출할 수 있다.
FIg 16. TAE buffer
- Tris Acetate, EDTA Buffer이며 전기 영동시 DNA
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실험에서는 EcoR Ⅰ, Nde Ⅰ, Xho Ⅰ의 3가지 제한효소를 사용한다.
⑦ Electrophoresis apparatus (전기영동장치)
⑧ Electrophoresis agarose
Fig 13. Electrophoresis apparatus
- 전기영동을 하는 기기로, DNA의 크기가 클수록 느리게 이동하게 되고, 전기장의 방향 또한
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실험을 성공적으로 진행했다고 할 수 있다.
※ 점착성말단과 비점착 말단
제한효소가 DNA를 절단한 뒤 잘린 부위는 점착성 말단 (sticky end)과 비점착성 말단(blunt end) 두 종류로 분류할 수 있다. 점착성 말단은 이중가닥의 DNA를 엇갈리게 절단하
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A를 만드는 단계이다. 이번 실험에서는 pfu polymerase를 통해 primer를 연장하여 새로운 DNA 가닥을 만든다. 원하는 PCR 산물의 크기가 크거나 반응효소의 농도가 낮을 때는 시간을 연장시킬 수도 있다.
(4) 전기영동 기기에 Agarose gel을 넣고 1X TAE buffer
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실험 시 유의사항
- 원심분리시킬 때 micro tube 끼리의 무게가 대칭이 되게 해야 한다.
- S1 Buffer는 중성 pH에 가깝기 때문에 사용하는 중에 오염될 위험이 있다. 따라서 저온에 보관해야 장기간 사용할 수 있기 때문에 냉장보관해야 한다.
- S2 Buf
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검액 1ml에 진한 질산 0.5ml를 가하면 백색 침전이 생긱고, 가열하면 황색이 된다.
② 냉각후 진한 암모니아수 또는 40% NaOH 1ml를 가하여 색변화를 관찰한다.
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실험이었지만 이번 실험을 통하여 재료 선택에 있어 중요한 요소 중 하나인 재료의 연성 측정 방법에 대하여 알았고, 앞으로 기계공학을 전공함에 있어 많은 선 영향을 미칠 것이라 생각한다. 다만 아쉬운 점이 있다면 이번 실험이 미경험과
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