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transformation을 통해 ampicillin에 내성을 갖게 되었고, LBA(LB+Ampicillin) plate에서 E.coli가 생장했다는 것으로 확인할 수 있었다.
일반적으로 transformation은 비교적 낮은 빈도로 발생한다. 그것은 transformation이 일어나기 위해서 bacterial cell wall이 얇아져
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ELISA)
e) 방사능 동위 원소를 이용하는 방법 (radiochemicals)
f) 바이러스의 효소를 이용한 방법
g) 분자생물학적 방법 (molecular biological technique)
. 핵산결합법 (nucleic acid hybridization)
. in vitro mutagenesis
. 중합효소연쇄반응 (Polymerase Chain Reaction, PCR)
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enzyme activity를 측정하고, standard calibration curve를 이용하여 각 sample 내 존재하는 catalase의 농도를 구한다.
2. Basic Principles
① Enzyme
Enzyme(효소)은 생체 내 여러 가지 화학 반응의 활성화 에너지를 낮추어 촉매 역할을 하는 단백질이다. 이들은 ac
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PCR의 내열성 DNA 중합효소인 Taq 중합효소는 뜨거운 온천에 사는 호열성 세균에서 추출한 중합효소로 DNA가 변성되는 94℃의 고온에서도 중합효소가 변성되지않고 그 활성을 오랫동안 유지할 수 있는 놀라운 특성이 있다.
7. References
- Taketoshi / P
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Restriction Enzyme
(EcoR Ⅰ, Nde Ⅰ, Xho Ⅰ)
Fig 11 . H buffer
- Tris-HCl (pH 7.5) 500mM,
MgCl2 100mM, NaCl 1000mM,
DDT(Dithiothreitol) 10mM 로 구성되었으며, 제한효소의 활성을 최대화하기 위해 pH를 조절해주는 용액이다.
Fig 12. 제한효소의 기능
- 제한효소는 DNA의 특정
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Lehninger Principles of Biochemistry (6th edition) W. H. Freeman. (2012)
- [네이버 지식백과] DNA [deoxyribonucleic acid] (미생물학백과)
DNA의 복제 , 중합효소 연쇄반응 (PCR) (생화학백과) 1. 실험 목적
2. 바탕 이론
3. 기구 및 시약
4. 실험 방법
5. 참고 문헌
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DNA를 만드는 단계이다. 이번 실험에서는 pfu polymerase를 통해 primer를 연장하여 새로운 DNA 가닥을 만든다. 원하는 PCR 산물의 크기가 크거나 반응효소의 농도가 낮을 때는 시간을 연장시킬 수도 있다.
(4) 전기영동 기기에 Agarose gel을 넣고 1X TAE buff
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Activity를 구하는 과정 중 0.5mL의 샘플링 과정에서 균질하지 않은 sample에서 substrate, buffer, protein의 비율이 일정하지 않은 점 또한 오차가 발생 할 수 있는 원인이라고 이야기 할 수 있다.
8. 참고문헌(Reference)
Activity
- Lehninger Principles of biochemistry,
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PCR에서 들었던 요인과 같다.
DNA 추출 과정에서 56℃ water bath에서 20분간 incubation을 하는 이유는 효소 활성화 온도를 맞추기 위해서이다.
사용된 gel에는 TAE buffer 완충용액을 사용하였다. 이 용액은 Tris, Acetate, EDTA 세가지 용액이 혼합되어있다. Tr
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Mg2+ 농도는 PCR을 실행할 때 다음의 사항에 관여하고 있는 것으로 여겨진다. ① 효소활성, ② primer의 annealing, ③ 합성된 DNA의 충실성, ④ primer-dimer의 형성 등이 있다. 킬레이트제(예를 들면 EDTA)는 반응액 속의 Mg2+ 농도에 영향을 미치므로 주형
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