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25㎖ T 플라스크로 옮겨 배양한다.
(2) 주의점
① 동결과 다르게 해동은 신속하게 해야 한다.
② DMSO를 제거하기 위해 배지를 첨가하여 원심분리를 한다.
③ 액체질소가 튀기거나 묻지 않도록 주의한다.
(3) 이론
- 해동을 할 때에는 천천히 하면
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해동하여 일정한 계대를 거친 세포를 실험에 제공하는 것이 필요하다.
⑵수립세포주
일반적으로 암세포화한 세포주이고, 무한증식능력이 있다. 따라서 정상세포의 경우와 같이 계대수를 파악하려는 것은 무용하다고 생각된다. 배양세포는
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해동 → 일정한 계대 배양 → 실험에 제공
유한 증식(limited proliferation)
사람 태아 세포라도 50 계대가 한계
접착의존성
일반적으로 세포는 유리 표면에 부착할 수 있는 당단백질성 물질을 생산
불멸화 세포 (immortalized cells)
세포를 어떤 조
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4.2.3. Vial을 분당 -1℃씩 천천히 냉동 시킨다.
4.2.4. Deep freezer 1일 보관 후 액체질소통으로 옮겨 장기 보관한다. 1. 동결세포의 해동 (Thawing)
2. 세포 수 측정 (Cell counting)
-Hemocytometer
3. 계대배양 (Subculture)
4. 세포의 동결보존 (Freezing)
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해동시키고 ligation solution 5㎕를 200㎕
c-cells에서 mix 했다. ice 30분 정치 후, heat shock 42 water bath 50초간 정치하고, ice에서 2분후에 YENB배지 800㎕ 첨가하여 mix 하여 37 1시간동안
shaking incubation한다. 준비한 Ap plate에 균 액 200㎕, 400㎕를 넣어 도말한
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