|
buffer, ice pack, blocking buffer), wrap, cassette, X-ray film, kims wiper, conical tube, e.p tube, vortex, slicon glove, racker, thermobath,
시약 1) SDS-PAGE
Separating gel component, stacking gel component, running buffer, 6x SDS loadingdye, protein marker
2) Western blot
Primary anti
|
|
|
buffer, ice pack, blocking buffer), wrap, cassette, X-ray film, kims wiper, conical tube, e.p tube, vortex, slicon glove, racker, thermobath,
시약 1) SDS-PAGE
Separating gel component, stacking gel component, running buffer, 6x SDS loadingdye, protein marker
2) Western blot
Primary anti
|
|
|
sample volume이 각각 달라서 완전히 동일선상에서 출발하지 않는다는 특징이 있다. 이 실험에서는 Slab gel, Dissociating buffer system, Discontinuous system을 이용하므로 SDS-discontinuous polyacrylamide gel electrophoresis를 진행한다. 1. 실험목적
2. 실험원리
3.
|
|
|
• Polyacrylamide gel
3.2 시약
• BSA(Bovine Serum Albumine) : 5 µlProtease inhibitor
• PC9 : 30ug (4.31 ug/ul ) (Sample 1)
• PC9/GR : 30ug (13.38 ug/ul ) (Sample 2)
• Sample buffer
• Running buffer
• Gel Releaser
• Stanining solution&n
|
|
|
SDS와 β-mercaptoethanol 또는 DTT가 들어있는 SDS-겔 loading 완충용액을 이용한다. 또한 분자량을 알고 있는 단백질을 표시자로 loading하면 시료 단백질의 분자량을 추정해 낼 수 있다.
SDS-PAGE의 또 다른 특징은 불연속 완충용액 시스템(discontinuous buffer
|
|
|
Buffer
2). 세포의 파괴와 분획
3). 단백질의 가용화 법(막단밸질의 가용화 방법)
4). 단밸질 정량법(Bradford 법)
5). Polyacrylamide gel
(SDS-polyacrylamide gel electrophoresis;SDS-PAGE)
6). 단백질의 염색
4. Procedure
5. Content of solutions & 그 용도
6. 실
|
|
|
SDS-PAGE
제 6 절 Western blotting
제 3 장 Materials and Methods
제 1 절 Culture condition
제 2 절 Agarose gel electrophoresis
제 3 절 Southern blotting
제 4 절 Southern hybridization
제 5 절 SDS-PAGE
제 6 절 Western blotting
제 4 장 Results and Discussion
제 1 절 gfp유전자
|
|
|
원하는 밴드 외에 나타난 다른 단백질의 밴드를 없애기 위해 바꿔줘야 할 condition은 무엇일까?
Q2) Affinity chromatography 중에서
Ni-NTA vs. GST(glutathione S-transferase) →elution 원리의 차이
Q3) SDS-PAGE에서 APS, TEMED, sampling buffer조성
5.Reference
|
|
|
sample을 loading할 때, E3과 E4의 위치가 바뀌어 loading되었다. 원하는 결과대로라면 E1, E4에서 얻어지는 Taq polymerase의 양이 E2, E3에서보다 적어야 할 것인데, E3과 E4의 양을 비교하여 보면 E4의 양이 더 많았다. 그 이유는 E2와 E4 사이의 SDS-PAGE well이
|
|
|
SDS-PAGE에서 대조군으로 작용하기 때문이다. P.M는 있고 F.T에는 없는 것을 AP로 추정할 수 있다. 대게 정제된 양의 35%정도를 AP라고 추정한다. 1M~2M의 고농도인 NaCl로 wash를 하고 20% 에탄올에 저온(4·C)상태로 보관하면 재활용 할 수 있다.
Reference
|
|
메뉴펼치기
