DNA의 결합

소개글

DNA의 결합에 대한 보고서 자료입니다.

목차

1. 제목

2. 목적

3. 원리

4. 재료

5. 방법

본문내용

중요한 요소는 반응액에서 DNA분자의 end 농도이며 이는 ligase의 기질로 작용하기 때문이다. 다음은 μg의 DNA를 moles of end로 바꾸는 공식이다.
μg DNA = f mole of DNA ends × 1μg/3000 fmol × size of DNA in bp/1000bp
(예) 2700bp 크기의 vector가 10 fmol of double stranded ends를 가지고 있다면 이에 해당하는 DNA농도(μg)는 얼마일까?
μg = 10fmol × 1μg/3000fmol × 2700bp/1000bp
= 0.009μg
* Ligation reaction에 영향을 주는 factor들
1) temperature
cohesive end의 종류와 길이에 따라 Tm값은 다르지만 일반적으로 15도 미만에서 반응한다. 이것은 효소의 최적온도는 37도지만 5도이하에서는 활성을 거의 나타내지 않기 때문에 Tm값과 최적온도 사이의 절충한 온도로서 cohesive end의 ligation은 12-15도에서 실시한다.
2) ionic concentration
3) DNA end type(cohesive or blunt)
4) relative concentration of DNA end
* blunt-end ligation
cohesive end를 가지고 있지 않은 경우 ligation은 보다 복잡하고 상당히 천천히 반응이 일어난다. Cohesive-end ligation은 blunt-end ligation에 비해 100배 빨리 진행된다. 이 이유는 blunt-end fragment는 anneal할 수 없기

키워드

ligation,   DNA,   dna결합,   합성효소,   클로닝