Digestion of DNA using restriction enzyme

목차

Ⅰ. Introduction.
1. 제한효소.
2. 제한 효소의 종류.
3. DNA의 절단.

Ⅱ. Materials

Ⅲ. Methode.

Ⅳ. Result.

Ⅴ. Discussion.

본문내용

Ⅰ. Introduction.
1. 제한효소.
DNA도 특정 부위를 절단할 수가 있는데 DNA를 자른다는 것은 nucleotide들이 연결되어 있는 phosphodiester 결합을 끊어내는 것이다. 이런 역할을 하는 효소를 nuclease라고 하며 바깥쪽을 자르는가 안쪽을 자르는가에 따라서 각각 exonuclease, endonuclease라고 부른다. Endonuclease의 대표적인 것이 바로 restriction enzyme 또는 restriction endonuclease이라고 한다. DNA에 존재하는 특정한 염기서열을 인식하고 인식한 서열부위 또는 그 근처에 존재하는 특정부위를 절단한다.
제한효소는 원래 세균이 자신의 세포 내로 침입해 들어오는 바이러스와 같은 외부 DNA를 제거하기 위한 방어기전으로 가지고 있는 것이며, 자신의 DNA는 절단부위의 염기를 Methylation시켜서 자신의 제한효소가 자신의 DNA를 자를 수 없게 보호하고 있다. 이 효소는 보통 외부 DNA 에 존재하는 4bp~8bp 길이의 특정 부위를 인식하여, 그 자리나 그 부근에 있는 DNA를 절단한다.
2. 제한 효소의 종류.
1) Type Ⅰ.
DNA의 측정 부위를 인식하긴 하지만 인식된 부뉘가 아닌 다른 부위를 절단한다. 즉, 인식 부위 자체는 특이성을 가지지만 절단 부위는 그로부너 약 1000bp 떨어진 부위를 절단하기 떄문에 원하는 부위만을 자르기가 쉽지 않다.
2) TypeⅡ.
이 유형의 경우는 인식부위와 절단 부위가 모두 특이성을 가지고 있는 제한효소로 세가지 유형 중에 가장 많은 종류와 이용도를 가지고 있으며, 실험에서 사용될떄 대부분 이 두번쨰 유형의 enzyme을 사용한다.
일반적으로 4~6bp의 특정한 염기배열을 인식하고 인식한 염기배열 내의 특정부위를 절단하게된다. 이는 DNA의 인식빈도가 달라지게된다는 것인데, 이론상 46 = 4096 base pair 마다 한번씩 출현하게 된다. 그 결과로 3’ 이나 5’ 말단의 모양이 밖으로나온형태인 sticky type, 그리고 끝이 무딘 형태인 blunt type 의 DNA가 만들어 진다.
제한 효소가 인식할 수 있는 부위는 앞으로 읽으나, 뒤로 읽으나 염기 서열이 같은 모양을 하고 있는 palindrome 인것이 특징이다. 앞서 말했듯이, 절단의 모양이 다르므로, 실험목적에 따라 잘 선택해서 사용해야 한다.

키워드

제한효소,   제한 효소의 종류,   DNA절단