병원미생물학실험_report_2_(미생물 순수배양)

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목차

1. 제목
2. 실험목적
3. 원리
4. 실험방법
5. 시약 및 실험기구
6. result
7. 고찰
8. 참고문헌

본문내용

실시하는 장소에서는 필수적인 설비이다.
이쑤시개 : 멸균하여 배지에 자라있는 단일콜로니를 떼어 내기 위하여 사용한다.
※ 실험에서 볼 수 있는 균들
대장균(Escherichia coli) : Gram 음성의 간균으로(2∼4)×(0.4∼0.7)㎛의 크기. 배양하기 쉽고 세균의 접합현상(conjugation), phage에 의한 형질도입(tr- ansduction)등 원핵생물이면서 유전적 해석이 되기 때문에 분자유전학의 대표적인 재료로서 옛날부터 사용되었다.
고초균(Bacillus subtilis) : 바실루스속에 속하는 대표적인 세균종의 일종. 토양, 건초, 먼지 등 자연계에 널리 분포하는 그람양성간균. 길이 2~3μm, 호기성으로 내생포자를 형성한다. 포자는 열, 방사선, 화학약품에 대하여 강한 내성을 보이며, 오랫동안 휴면 상태를 유지한다. 일찍이 형질전환현상을발견하였으며, 간단한 배지에서 생육할 수 있으므로 분자유전학, 재조합DNA실험 등의 연구에 널리 이용되었다. 고초균은세포외 효소의 아밀라아제나 프로테아제 등의 생산균으로서응용미생물학 상 중요하며, 최근에는 유전자공학의 재료로서도 주목받고 있다.
장구균(Enterococcus faecalis) : 그람양성인 연쇄상구균. 고 바야시분류의 Ⅲ형,란스필드 분류의 D군에 속한다. 대표종은 Enterococcus faecalis및 E. faecium인데, 사람이나 온혈동물의 장관 내에 상재하여 분(糞)에 나타난다. 양자 모두가 담즙에 저항성이다. 더구나 이 균은 질화나트륨에 저항성을 나타내기 때문에 질화나트륨 함유배지를 사용하여 분리한다. 병원성은 일반적으로 낮지만 드물게 아급성 심내막염이나 요로감염의 원인이 된다거나, 극히 드물게는 감염형 식중독을 일으킨다. 또한 이 균은 분유래 균이기 때문에 식품이나 공공용수 등의 분오염지표로 이용된다.
6. result
1일째에 시행했던 액체배지 희석법에 의해 각각의 10-6 ,10-7, 10-8로 희석한 배지를 Overlay한
것 들이다. 희석 배율에 따라 colony수가 확연하게 달라지는 것이 보이며, 생김새의 특징으로 보아 세 가지 종류의 균들이 관찰된다.
생김새의 특징으로만 구분하여 세가지 종류의 균을 streaking하여 도말시킨 모습이다.
각각의 배지가 모두 생김새가 확연히 다른 것으로 보아 각 세균별로 접종이 성공적으로 이루어진 듯하다.
첫 번째 특징 : 세 종류 중 크기가 가장 작은 것이 페칼리스 균이다.
두 번째 특징 : 비슷한 크기의 두 종류 중에 윤기가 있는 것이 대장균이다.
세 번째 특징 : 비슷한 크기의 두 종류 중 윤기없이 바짝 말라보이는 것이 바실러스 균이다.
실험결과 비교를 위해 다른 조(2분반 4조)의 배지도 관찰해보았다.
크기와 모양이 각기 다른 두 종류의 콜로니가 관찰되는 것으로 보아
접종·배양에서 문제가 있었던 것으로 보인다.
이쑤시개로 균을 뜰 때 한 종류의 균이 더 딸려온 것으로 예상된다.
7. 고찰
이번 실험은 균의 순수배양과 여러 종의 섞인 균을 순수 분리 하기 위해 그 기술들을 익히는데 목적이 있다.
첫째 날은 미리 실험조교가 주입평판법으로 만들어놓은 배양액으로 Overlay하는 것이었다. 주입평판법은 시료를 먼저 넣고 배지를 붓는 방법으로 호기성 세균은 공기를 필요로 하기 때문에 위쪽으로 형성되고, 혐기성은 공기를 필요로 하지 않기 때문에 아래로 내려가, 호기성과 혐기성 세균이 분리 된다는 장점을 가지고 있다. 그렇게 만들어진 배양액 100㎕에 물 900㎕을 넣으면 10-2의 희석액이 만들어지고, 여기서 다시 물 900㎕에 10-2희석액 100㎕을 넣고 피펫팅 해주면 10-3의 희석액이 만들어진다. 이와 같은 과정을 반복하여 각각 10-6 ,10-7, 10-8의 희석액을 만들었다. 왜 하필 10-6 ,10-7, 10-8일까 하는 의문이 들었지만, 실험 결과를 통해 10-6 ,10-7, 10-8의 희석액이 가장 이상적인 균의 분포가 나온다는 것을 알게 되었다. 그러나 이쑤시개로 균을 채취하는 과정에서 10-6희석액은 한 종류의 균을 채취하기엔 너무 균이 빽빽해서 10-7에서 각기 다른 세 종류의 균을 채취하여 TSB배지에 접종하였다. 시간이 지나면 TSB배지가 뿌옇게 흐려지는데 이는 균이 자랐다는 증거가 된다. 다른 균이 같이 딸려올까봐 아주 노심초사하며 채취했는데 실험 결과를 보니 다른 조에 비해 아주 만족스러운 결과를 얻었다.
다음 날 그렇게 배양된 균을 보존하기 위해 stock을 만들었다. 먼저 원심분리기로 밀도차를 이용해 균과 배지 성분을 8000rpm에 4℃로 5분을 돌리면 밑에 가라앉는 것이 보이는데 그것이 균이다. 위에 나머지는 상등액이므로 버린다. 하나는 100㎕를 따서 streaking하고 영하 80℃에서 보관하여 언제든지 쓸 수 있게 해놓고, 나머지는 1mL씩 넣고 물과 20%글리세롤을 넣은 뒤, 피펫팅(손으로 흔들면 균이 오염될 수도 있다.)하여 완전히 현탁시킨다.
Q. 왜 글리세롤을 첨가하는가?
A : 물은 얼 때 결정이 생기는데 이 때 균이 결정에 찔려서 영향을 입을 수 있기 때문이다. 글리세롤을 넣음으로서 뾰족한 결정을 완화시켜 세포에게 주는 데미지를 최소화 시킨다.
8. 참고문헌
미생물학 실험 기초와 응용27~35p. - 월드 사이언스
미생물학 실험 139~167p. - 고려의학
응용 미생물학 실험58~66p. - 효일출판사
http://everymachine.tistory.com/1991
http://blog.naver.com/pianosuk?Redirect=Log&logNo=60064320335
http://blog.naver.com/oodmd?Redirect=Log&logNo=90107766702
http://blog.naver.com/dslab24n?Redirect=Log&logNo=70100396549
http://kin.naver.com/qna/detail.nhn?d1id=11&dirId=1115&docId=54173843&qb=NzAlIOyXkO2DhOyYrCDsgqzsmqntlZjripQg7J207Jyg&enc=utf8§ion=kin&rank=19&search_sort=0&spq=0

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