병원미생물학실험_report_5_(항균성실험)

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목차

1. Subject
2. Object
3. Principle
4. Apparatus & Reagents
5. Procedure
6.Result
7.고찰
8. 참고문헌

본문내용

. 단열이 좋은 상자의 내부에 온도 제어기를 설치한 것이 기본구조이다. 인큐베이터라는 용어의 의미 확대(부란하다, 일정온도로 유지하다)로 항온조절장치까지 인큐베이터라고 부르게되었다. 동물세포의 배양용으로 이산화탄소 농도를 일정하게유지하도록 설계하고 있어CO2 항온기(CO2 인큐베이터)라고도한다.
microtube
마이크로 피펫을 이용하여 용액을 넣거나, 균을 희석하여 보관 할 때에 사용한다.
5. Procedure
① 사용되는 균(E.coli, Bacillus subtilis)을 각각 105으로 희석시킨다.
② 희석시킨 균을 Mueller-Hinton 배지에 500㎕ overlay한다.
③ overlay 후, clean bench 안에서 물기가 거의 없을 정도로 말린다.
④ paper disk에 항생제(Tetracycline, Ampicillin)를 각각 10㎍/㎖, 20㎍/㎖, 40㎍/㎖, 80㎍/㎖에 접종하고, control로 사용 할 디스크에 메탄올을 접종한다.
⑤ 어느 정도 말린 후 멸균한 핀셋을 이용해 접종한 디스크를 overlay한 배지에 올려 놓고, 디스크 중앙을 가볍게 눌러 배지 표면에 완전히 부착시킨다.
⑥ 디스크 간의 간격은 충분히 떨어져야 한다. 각 디스크 중심 간의 간격은 24mm 이상이어야 하며 평판 가장자리로부터 15mm 이상 떨어져야 한다.
⑦ incubator ( 37℃, 24~48시간)에서 배양을 실시한 후 결과를 관찰한다.
6.Result
E.coli 와 Bacillus에 각각 ampicillin과 tertracycline을 접종하였다.
E.Coli에 ampicillin과 tetracycline 접종 시킨 결과
항생물질 농도가 높아질수록 억제구역의 직경도 커지는 것을 볼 수 있다.
tetracycline에 균이 자라지 않은 빈공간이 발견 되었다.
bacillus에 ampicillin과 tetracycline 접종 시킨 결과
억제구역이 제대로 보이지 않으며 별다른 차이도 보이지 않는다.
1조 실험 결과와 비교해보았다. 1조의 실험 결과는 억제구역이 확실히 구분되며,
균 수 차이도 눈에 띄게 다르다.
디스크 억제구역 직경
E. coli
E. coli
con
0
con
0
Ampicillin 10㎍
0.8
Tetracycline 10㎍
0.9
Ampicillin 20㎍
1.1
Tetracycline 20㎍
1.2
Ampicillin 40㎍
1.6
Tetracycline 40㎍
1.4
Ampicillin 80㎍
2.4
Tetracycline 80㎍
1.5
7.고찰
이번 실험은 해당 균주가 특정 항생제에 감수성이 있는지 혹은 내성을 나타내는지 알아보는 실험으로 가장 흔히 쓰이는 디스크 확산법을 하였다.
실험 결과를 보면 대장균은 균이 항생제에 의해 사멸하고 자랄 수 없는 억제구역이 확실히 구분되었고, 항생제 농도가 높아짐에 따라 억제구역도 커지는 것을 알 수 있었다. 그러나 각 항생제의 10㎍를 접종시킨 곳에는 억제구역이 거의 생기지 않는 것으로 보아 10㎍의 접종량에는 내성이 있는 것으로 생각된다. 테트라 사이클린을 접종시킨 배지에는 빈공간이 보이는데, 이는 오버레이를 제대로 하지 못해서 생긴 실수다.
바실러스를 배양한 곳에 디스크를 올려놓은 배지는 억제구역이 잘 구분되지 않으며, 80㎍에는 아주 미세하게 억제구역이 관찰되긴 하지만, 억제구역에 생긴 콜로니 수가 너무 많은 것으로 보아, 내성에 의해 생긴 것은 아닌 듯 하다. (억제구역 내에 생기는 몇몇의 콜로니는 그 항생제에 대해 내성을 가지고 있어서 죽지 않고 형성된 것이다.)
대조군을 두기 위해 1조의 실험 결과와 비교해 보았더니, 바실러스의 콜로니 수가 1조에 비해 적게 형성 된 것으로 보았다. 이는 균을 희석해 나갈 때 문제가 있었다. 1조는 억제구역 또한 내성균주가 일부 보이긴 하여도 확실히 육안으로 구분이 되었지만, 본 실험조는 구분이 힘들 정도로 억제구역이 제대로 형성되지 않은 것으로 보아 디스크에 항생제 접종이 제대로 되지 않아서 일어난 것일 수도 있고, 페이퍼 디스크를 배지에 올려놓을 때 너무 깊숙이 찔러 넣어서 항생제가 배지에 제대로 확산되지 않았을 수도 있다.
1조의 결과로 보았을 때 바실러스와 대장균의 동일한 항생제에 대한 감수성이 다른 이유는 균마다 항생제에 대한 민감도가 다르다는 것을 보여준다. 또한 디스크 확산법으로는 특정 항생제에 대한 감수성 정도를 정확하게 알 수 없는데, 그 이유는 물질의 확산도, 접종량, 배지 종류 및 다른 요소에 따라 결과가 다양해지고, 분자량, 전하량, 용해도 같은 요소들이 각 항생물질의 확산율에 영향을 미치기 때문이다. 디스크 확산법은 단지 세균이 어떤 항생물질에 대해 내성의 유무만을 알 수 있고, 정확한 항생제의 농도에 따른 감수성을 알기위해선 최소저해농도를 구할 수 있는 E-test 확산법 실험이나, 그 외의 다른 방법의 실험이 필요하다.
8. 참고문헌
대학생물학 실험 - 강원대학교 출판부 (139p.~144p.)
Benson's미생물학 실험 - 지코사이언스 (221p.~225p.)
미생물학 실험 - 고려의학(191p.~200p.)
http://terms.naver.com/entry.nhn?docId=367301
http://kin.naver.com/knowhow/detail.nhn?d1id=5&dirId=5&docId=166794&qb=QW1waWNpbGxpbg==&enc=utf8§ion=kin&rank=9&search_sort=0&spq=0
http://www.google.co.kr/search?hl=ko&q=Ampicillin&lr=
http://cpl.yonsei.ac.kr/micro/textbook/text0-0.htm
http://kin.naver.com/qna/detail.nhn?d1id=11&dirId=1116&docId=61923853&qb=7Jik7Yag7YG066CI7J2067iMIOyCrOyaqeuylQ==&enc=utf8§ion=kin&rank=2&search_sort=0&spq=0&pid=gOAZ0doi5Usssa1tZ0Gsss--298661&sid=TdhaUmhE2E0AAEhRCts

키워드

병원미생물학실험,   병미실험,   병미,   항균성,   항균제,   감수성,   MIC,   디스크 확산법